应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 求助构建shRNA敲除载体遇到问题
241/1返回列表
查看: 2417  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shnmyx

铜虫 (正式写手)
已领完
求助构建shRNA敲除载体遇到问题
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

本人第一次做分子实验，从设计shRNA，构建shRNA敲除载体开始，现在已经构建好，开始验证是否构建正确，遇到如下问题，想请教路过的各位大神，谢谢。
问题1: 将构建好的质粒转化大肠杆菌，从同一个板上挑了三个转化子摇菌，分别提取质粒，经跑胶验证质粒是否提出来，大小是否一致，结果发现三个质粒不是同一个大小，有人遇到过这种情况吗？是什么原因呢？是我构的质粒有问题还是这种本身就会出现假阳性克隆？
问题2：为了验证酶切空载质粒回收这一步是否正确，有人建议将酶切回收后的这段序列进行转化铺板，如果板上不长菌就说明酶切空载这步是正确的，但是结果是长了，我当时觉得我的质粒加多了，正常的别人质粒浓度1000ng/ul，只加1ul，我当时加了4ul，会不会部分没有切成功，导致回收的片段中还有完整质粒存在，这样做能说明质粒没切成功吗？大家一般会这样做来验证吗？
问题3：如果排除前面的问题，我最后构建的符合我要的发大小的质粒，做了双酶切验证，发现都是符合我的要求的，唯一就是问题2中出现的问题，如果没长就确定我构建成功，但是现在长了，是否证明我没有构建成功？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2019-08-17 09:59:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rohdy

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提了质粒酶切条带大小正确的拿去测序就好了，没必要做太多验证

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
17楼2019-08-17 10:54:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shnmyx

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by rohdy at 2019-08-17 10:54:43
提了质粒酶切条带大小正确的拿去测序就好了，没必要做太多验证

老师不让测序

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
23楼2019-08-17 16:05:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rohdy

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
23楼: Originally posted by shnmyx at 2019-08-17 16:05:52
老师不让测序
...

不测序你没法证明序列正确呀，要么你就直接转细胞做PCR或WB确认下目的mRNA和蛋白表达降低了

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
24楼2019-08-17 16:20:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
zfpd27662楼
2019-08-17 10:00   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
pandongzi3楼
2019-08-17 10:00   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
hdchina20104楼
2019-08-17 10:00   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
木鸟0015楼
2019-08-17 10:01   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
秋土豆香6楼
2019-08-17 10:01   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
zhulei03247楼
2019-08-17 10:01   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
梅影霜天8楼
2019-08-17 10:05   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
weizhe349楼
2019-08-17 10:06   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
dzxylxm10楼
2019-08-17 10:07   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
yuying042111楼
2019-08-17 10:21   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
泽林 冷Z12楼
2019-08-17 10:25   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
wangyongyu13楼
2019-08-17 10:44   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
?W痕14楼
2019-08-17 10:45   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
CL2014化生15楼
2019-08-17 10:50   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
rohdy16楼
2019-08-17 10:52   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
youngbyn18楼
2019-08-17 11:11   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
shilidawei19楼
2019-08-17 11:21   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
无关用户+120楼
2019-08-17 11:24   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
tzynew21楼
2019-08-17 11:24   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
nadp16322楼
2019-08-17 11:27   回复  
shnmyx(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 shnmyx 的主题更新
241/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +11 医学老男孩 2026-08-13 29/1450 2026-08-14 00:04 by 大快人心啦
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭