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基因组抽提如何避免盐析出
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大家好！我最近在抽提动物基因组时，遇到了一些问题，麻烦高手帮忙解疑。 我采用传统方法抽提基因组的。具体步骤为： 1. 液氮磨碎样品，加1ml基因组抽提Buffer（组分为：10mM Tris-HCl，100mM EDTA，1% SDS）和10ul蛋白酶K 50度水浴消化过夜； 2. 后加2ul RNase A 37度消化1h； 3. 加等体积的酚：氯仿：异戊醇，混匀10min，离心取上清，共纯化两遍； 4. 取上清，加等体积的氯仿（-20度保存），混匀10min，离心后取上清； 5. 加等体积的异丙醇和1/10体积的醋酸钠，混匀。 问题就在这第5步，加过异丙醇和醋酸钠后，马上就开始出现白色絮状沉淀，然后再混时，很快就出现很多颗粒状的白色东西，离心后发现，管底有非常多白色的沉淀，是盐。之后用75%乙醇也洗不掉。同样的方法做过很多次，之前从来没遇到这种情况，不知怎么盐会析出。请高手指点，感激不尽！！！ 发自小木虫IOS客户端 |
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