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Tengly

新虫 (初入文坛)

[求助] 大鼠软骨细胞的II型胶原免疫组织化学染色

最近在做大鼠原代细胞的分离与鉴定,包括甲苯胺蓝染色和II型胶原的鉴定,这个II胶原的鉴定,我是爬片、4%多聚甲醛固定、0.5%TritonX-100通透、5%山羊血清封闭,一抗4度过夜,二抗暗室孵育1h,但是在荧光显微镜下看不到颜色。
我看很多文献,在这个操作的基础上还要在用DAB和苏木素复染。
问题一:为什么附完一抗二抗荧光显微镜下却观测不到呢?(二抗是带荧光的)
问题二:为什么后面要用那两个染色剂染呢?

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