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耀日光

新虫 (小有名气)

[求助] SEM扫描电镜下如何保证菌体形态 已有1人参与

如题,最近做了金葡和大肠杆菌的电镜,我的对照组拍出来的图片中菌体形态破裂不完整,想请教大家如何拍出菌体形态好的图片,我的处理步骤如下:将菌液在5000r/min离心5min三次去除培养基后用2.5%戊二醛(用PBS配制)在4℃过夜处理后用PBS洗涤3次,用30%、50%、70%、85%、90%、95%的酒精处理,每次处理15min,用8000r/min离心,最后用100%的酒精处理两次每次15min,滴在硅片上自然风干(没有用冷冻干燥),按理说我的对照组应该是表面光滑无裂痕的,请各位能给我一些建议,我的步骤是哪里有问题啊?
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bennyg

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

滴在硅片上自然风干(没有用冷冻干燥),这步有问题,当然要冷冻干燥才能保存完好结构,记得还有一步锇酸处理
努力,技巧
2楼2019-08-20 16:10:45
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gangbadiez

新虫 (小有名气)

您好。冒昧请教,在做细菌电镜时,您的戊二醛是如何配置的呢?我用0.1MPBS缓冲液配制的2.5%戊二醛,非常容易变黄并逐渐深化、浑浊
3楼2021-12-12 18:36:03
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