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beibei3372

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助:碱性磷酸酶处理质粒片段的问题

由于质粒是单酶切的,所以在做连接前需用磷酸酶(TAKARA的CIAP)处理去除载体片段5‘-末端的磷酸基,
体系就按说明说上的使用例子50微升体系,然后37度反应了一个小时,酚氯仿抽提一次(使CIAP失活),乙醇沉淀,最后是用70微升的TE重溶的(开始的质粒载体是从约150微升的胶回收体积得来),
上样10微升,跑胶无条带;上样20微升,有很淡的弥散条带……
恳请各位高手的指点!!!非常感谢!!!

[ Last edited by beibei3372 on 2009-5-29 at 15:49 ]
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临风7071

木虫 (正式写手)


beibei3372(金币+1,VIP+0):我再试试看,谢了哈! 5-29 15:58
70微升溶太多了把?用25-30微升溶吧!
弥散条带可能是你在抽提过程中震荡剧烈所致

[ Last edited by 临风7071 on 2009-5-29 at 12:25 ]
2楼2009-05-29 12:17:18
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anik

银虫 (正式写手)

酚氯仿抽提,好像不能剧烈晃动
3楼2009-05-29 16:48:38
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beibei3372

金虫 (初入文坛)

直接加入就好了吗?

引用回帖:
Originally posted by anik at 2009-5-29 16:48:
酚氯仿抽提,好像不能剧烈晃动

直接加入就好了吗?不需要混匀一下?
4楼2009-05-29 17:03:54
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