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beibei3372金虫 (初入文坛)
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求助：碱性磷酸酶处理质粒片段的问题
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由于质粒是单酶切的，所以在做连接前需用磷酸酶（TAKARA的CIAP）处理去除载体片段5‘-末端的磷酸基， 体系就按说明说上的使用例子50微升体系，然后37度反应了一个小时，酚氯仿抽提一次（使CIAP失活），乙醇沉淀，最后是用70微升的TE重溶的（开始的质粒载体是从约150微升的胶回收体积得来）， 上样10微升，跑胶无条带；上样20微升，有很淡的弥散条带…… 恳请各位高手的指点！！！非常感谢！！！ [ Last edited by beibei3372 on 2009-5-29 at 15:49 ] |
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