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dlyxy5881

新虫 (小有名气)

[交流] 酶切后为什么总连不上??

载体是pet28 ,目的片断是2500bp,双酶切后切胶回收条带大小正确,亮度也可以,连接体系是10ul,载体与目的片断1:3,过夜,16度,涂板 后要么不长,要么就2个左右,请问这到底怎么回事,该从哪些方面考虑原因??
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dlyxy5881

新虫 (小有名气)

做转化时,也要进行对照,设4个:
A.即拿双酶切的质粒产物也进行连接反应,这个对照可进一步看双酶切是否成功,如果长出克隆,说明很有可能只进行了单酶切,如没长出克隆,则证明双酶切成功,当然要保证感受态,培养基,连接酶都“正常”的情况下。

酶切后的质粒产物????是什么??
9楼2009-05-31 08:19:57
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
考虑下感受态做得怎么样。将感受态不转化,涂个无抗板,看看长得怎么样。
Thank-you,so-blue.
2楼2009-05-28 10:24:50
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juke9910

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是没切开吧,连接应该不成问题。不知道楼主什么酶切条件,也可能是转化时手法问题或者感受态本身问题。
3楼2009-05-28 11:21:31
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xj22667

银虫 (小有名气)

估计十有八九是感受态的问题 你重新换感受态试一下
4楼2009-05-28 11:39:58
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