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求菌株复苏和保存方法 已有3人参与
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如题，买了铜绿假单胞菌的菌株冻干粉，在网上也看了一些复苏和保存的方法但是还有地方不清楚想问下各位虫友们 1、打算用甘油低温保存（-80℃），求问虫友们在此条件下都是怎么保存的菌株条件会比较好？就是多少ml的菌液加上多少ml的甘油，甘油含量是多少，大概保存时间是多少。 2、在-80℃情况下保存菌株的话必须使用冻存管吗？用普通的EP管行不行？ 3、不知道各位有没有菌株复苏和保存的教学视频？本人新手小白，周围都是养细胞的大佬们，没有做这个的，想看看教学视频更保险一点，谢谢啦！ |
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4楼2019-07-09 20:30:45
linli1031
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2楼2019-07-09 17:37:52
linli1031
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3楼2019-07-09 17:38:05
xinxiyuzhou
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【答案】应助回帖
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小冀-: 金币+5, 鼓励回帖交流，详细，有帮助 2019-07-10 10:59:38
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| 甘油菌冻存时间至少一年以上是没有问题的，时间估计可以更长。甘油的浓度是15%到30%，可以先用双蒸水配成60%或者30的浓度，高压灭菌，使用时与菌液1:1稀释。普通的灭菌EPG就可以了。如果是常用的菌株，可以斜面划线保种，斜面划线这个你应该会吧，过夜培养，第二天收起来，每次使用时用接种环挑一点到培养基里，斜面保种至少保存一个月没有问题。一般拿到的菌种最好四区划线(细菌的基本操作）得到单克隆，然后用接种环挑单克隆到LB培养基（不同细菌可能培养基不一样），过夜培养（这时候也可以保种），或者收起来4度放置，晚上按1:50或者1:100的比例接种到5ml 培养基中，第二天再保种。如前面所说，取500微升菌液，加入500微升甘油，震荡混匀，做好标记（菌种名，抗性，日期等），封口膜封口，直接放置-80保存就行。 |
5楼2019-07-10 09:34:49