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【求助用Klneow酶补平后，载体的酶切问题】~~：【2009年6月10日】】
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我的基因是在18T 上的，首先利用18T上面的酶切位点（SalI） ，酶切使其呈线性，用Klneow来补平使其成平末端，再利用另外一个酶切位点(SacI)切下基因，使基因一边是一个平末端，另外一边是酶切位点(SacI)。 但是我用Klneow酶补平后，总是切不开。 是不是SacI和SalI的缓冲液相互影响？ 还是Klneow酶或者BUFER对后面的酶切有影响？我用SacI酶切后跑电泳，还是一条带是载体加我基因大小。酶切开，试过用4hr,8hr,10hr... 酶切后我都有加loading buffer ，然后用回收试剂盒回收。是否要加loading buffer终止反应后，还是直接回收？ 中间是否需要用酚氯仿乙醇进行抽提？如何做啊？？具体步骤谢谢 谢谢 很急啊 做了很久了···· |
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