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xydlengyue金虫 (正式写手)
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[求助]
接合转移后筛选单交换子问题
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rt 本人最近在做奇异变形杆菌的一个基因的敲除 前面都蛮顺利的 然后到了接合转移后筛选单交换子这一步了 进行了无数次 就是无法pcr出两条长短不一的条带。 我是这么做的 把鉴定正确的连接到t载体上的包含自杀性的缺失基因（连接产物在感受态细胞x7213中）作为供体菌，野生株作为受体菌 摇到2个浓度差不多时候 各取100微升 放入500微升的lb中 不加抗生素 过夜摇菌 然后取100微升涂到氯霉素抗性平板上 挑选单菌落在加了氯霉素的lb中摇菌鉴定 然后pcr鉴定（酶是2xestaq 蓝色的） 但是一直只有一条带（没有缺失的） 求助为什么 奇异变形杆菌之前在加了氯霉素的lb中不生长 但是结合转移了之后就可以生长 按理说是转进去了 但是为什么pcr鉴定不出来 只能鉴定出来野生型的那条带 没有缺失的 心态快炸了 |
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xydlengyue
金虫 (正式写手)
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2楼2019-06-26 16:19:00