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【求有关耐药标准的资料】+【有效期至2009年5月26】
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求 CLSL鲍曼不动杆菌判断标准 CLSL肺炎克雷伯杆菌判断标准 CLSL大肠埃希菌判断标准 或者有美国临床实验室标准化委员会对药敏检测的标准~~ |
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2楼2009-05-25 18:07:58
3楼2009-05-26 12:11:36
CLSL鲍曼不动杆菌判断标准
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gopingwater(金币+3,VIP+0):谢谢，但不是我要的，谢谢 5-26 12:36
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鲍曼不动杆菌的基因分型及耐药性分析 张婧 徐丁 田菲 韩立中 倪语星 郭晓奎 (上海交通大学医学院, 上海 200025) 作者简介: 张婧(1987-)，女，临床医学八年制在读学生，从事分子流行病学研究; 田菲, 通讯作者, Email: ceci@sjtu.edu.cn [摘要] 目的 分析上海某综合性医院不同科室来源的鲍曼不动杆菌菌株的同源性及耐药状况，了解鲍曼不动杆菌院内感染流行情况。方法 采用重复序列PCR技术（REP-PCR），对51株临床分离的鲍曼不动杆菌菌株进行基因分型，并用纸片扩散法进行药敏试验。结果 51株鲍曼不动杆菌分为13个基因型，其中A型16株，为主要流行型别；C型、D型各6株；M型有5株；E型、F型和G型各3株； B型、H型和K型2株；I型、J型、L型各1株。药敏试验结果显示分离出的菌株对常用抗菌药呈现出多重耐药的现象。其中对阿米卡星和亚胺培南的耐药性最低，均为33.3%；对头孢唑啉耐药性最高，为100%。结论 鲍曼不动杆菌基因的同源性分析表明，该院存在着以A型鲍曼不动杆菌为主的感染流行，估计该型菌株可能以克隆株的形式播散。鲍曼不动杆菌的耐药性很强，应加强其耐药性监测，合理使用抗菌药物。 [关键词] 鲍曼不动杆菌、基因型、重复PCR指纹图、耐药性、医院感染 Study on the genotypes and antibiotic resistance of Acinetobacter baumannii ZHANG Jing, XU Ding, TIAN Fei, HAN Li-zhong, NI Yu-xing, GUO Xiao-kui (Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 200025, China) [Abstract] Objective To study genotypes and resistant trend to antibiotics of Acinetobacter baumannii from different departments in a hospital in Shanghai, and evaluate the prevalence of A. baumannii nosocomial infection(NI). Methods Fifty-one strains isolated from patients were typed by genomic DNA by using the repetitive extragenic palindromic PCR (REP-PCR) and tested by K-B for drug susceptibility and identified according to the new standard of CLSI 2004. Results Fifty-one strains of A. baumannii were divided into 13 genetypes by REP-PCR. Among them, 16 strains were type A, which is the major type. Type C and D had 6 strains each; Type E，F and G were 3 strains; Type B, H and K were 2 strains; the other types were only 1 strain. The rate of resistance to Amikacin and Imipenem were the lowest (33.3%). The rate of resistance to Cefazolin was the highest (100%) Conclusion In this hospital there was the prevalence of a certain genotype of A. baumannii, and it can be clonal dissemination. Its resistant trend to antibiotics is developing to multidrug resistance with complicated resistant mechanism. Thus attention should be paid to this pathogen. [Key Words] Acinetobacter baumannii; Genotype; REP-PCR; Drug resistance; nosocomial infection 鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)为革兰阴性条件致病菌，广泛存在于自然界中，并可在医院环境中长期生存，特别是机体抵抗力下降或免疫功能受损时更易出现相关院内感染，如肺炎、尿道感染、伤口感染、脑膜炎和菌血症等。该菌临床分布以重症监护病房（ICU）多见[1]，已成为院内感染的主要病原菌之一，常可引起ICU、烧伤病房、新生儿室等院内感染的暴发和流行。近年来，不动杆菌的感染率逐渐上升。据美国院内感染监测数据及中国院内感染病原菌调查显示，鲍曼不动杆菌在院内感染中占第四位，成为仅次于铜绿假单胞菌的又一个非发酵菌。在某些地方，不动杆菌的感染甚至已超过了铜绿假单胞菌。另外，随着广谱抗生素的广泛使用及介入性操作的普及，鲍曼不动杆菌的耐药率也逐年增高，出现了多重耐药甚至“全耐药”的鲍曼不动杆菌[2] ，且很容易通过交叉感染在医院内爆发流行，给临床治疗带来严重挑战。因此，对鲍曼不动杆菌进行同源性分析，并且掌握它的临床分布特点和耐药性变化，对预防该菌的感染和指导临床用药十分重要。 重复序列PCR(REP-PCR)是在随机扩增DNA多态性(RAPD)的基础上发展起来的对细菌DNA进行指纹图谱分析的一种方法。利用细菌基因组中广泛分布的短小、高度保守且重复的序列为模板，经PCR扩增后产生一系列的DNA片段，通过电泳条带比较分析，揭示基因组间的差异，并判定细菌间的亲缘关系。其方法较为简便，重复性较好，无需特殊仪器和试剂，是院内感染分子流行病学中较理想的分析方法[3]。因此我们采用REP-PCR对临床分离的51株细菌基因组DNA进行了分型研究，并对其耐药性进行检测。 1、材料与方法 1.1 菌株来源 上海某综合性医院临床微生物科2007年7-8月收集的住院患者送检标本(包括痰、咽拭子、尿、创面或伤口分泌物、血、脑脊液、大便标本）分离的医院感染鲍曼不动杆菌51株。全部菌株均使用法国生物梅里埃公司ATB细菌鉴定仪鉴定菌种。 1.2 REP-PCR及反应体系 1.2.1 细菌DNA的提取 挑取单个克隆的纯培养菌落于LB液体培养基中，250转37℃培养过夜。吸取2mL的菌液置于Eppendorf管中，先煮沸10分钟，再置于-20℃冰箱中冷却10分钟，如此反复三次。6000转1分钟离心取上清液做模板。 1.2.2 引物序列(由上海生工生物工程有限公司合成) REP 1 : 5’-IIIGCGCCGICATCAGGC-3’ REP 2 : 5’-ACGTCTTATCAGGCCTAC-3’ 1.2.3 扩增条件 25μL的反应体系中，包括2×Taq Master Mix (北京天根生化科技有限公司) 12.5μL，上下游引物各16pmol、模板 5μL，用ddH2O补至25μL。扩增条件如下：95℃预变性3min, 90℃变性30s, 45℃退火1min, 65℃延伸8min,共循环30次，最终65℃延伸16min [3]。 1.2.4 扩增产物检测 扩增产物取20ul进行1.5%琼脂糖凝胶电泳。 1.2.5 DNA同源性分析 条带数目和位置完全相同者为同一基因型。 1.3 药敏试验 采用K-B法测定13种抗菌药物的敏感性。MH琼脂干粉培养基购自上海中科昆虫生物技术开发有限公司，所用的药敏纸片均购自美国BD公司。试验结果根据美国CLSI(原NCCLS)2004年版要求进行抗菌药物敏感性判断。 1.4数据统计分析 整合所测菌株的REP分型结果、药敏试验结果和科室信息，转化成相应代码后用Clustal X软件进行自动排序，用MEGA软件构建树形亲缘关系结构图。 2 结果 2.1 51株鲍曼不动杆菌基因同源性分析结果 用REP-PCR的方法对51株鲍曼不动杆菌DNA扩增，根据电泳的条带的结果进行基因分型。一共分成13个基因型。其中A型16株，C型、D型各6株；M型有5株；E型、F型和G型各3株； B型、H型和K型2株；I型、J型、L型各1株。各型的条带图样见图1。 图1 51株鲍曼不动杆菌的13种基因型图谱 (注：此图谱是由不同图谱上的条带剪切拼接而成) 51株鲍曼不动杆菌分别来自呼吸科病区、外科ICU病区、血液科病区等病房。A型菌最多，有16株，可见它是主要的流行型别。此外，从表1中可见，同一病房分离的菌株基因型可不相同，但也有从同一病区分离出几株基因型相同菌株的例子，例如呼吸科监护病区和感染科病区分别分离出了四株A型菌，外科ICU病区分离出了3株M型菌，说明在这些病区有可能发生了院内感染。 表1 鲍曼不动杆菌基因型结果与分布 基因型 来源科室 (菌株编号) A 移植三病区(1)、呼吸科监护病区(6,17,21,50)、血液科病区(8)、外科ICU病区(9)、急诊ICU病区(10)、感染科病区(14,15,23,30)、呼吸科病区(26)、心胸外科二病区(35)、急诊内科(41)、灼伤病区(51) B 血液科病区(16)、急诊一病区(39) C 血液科病区(5)、呼吸科病区(24,29)、外科ICU病区(31,47)、呼吸科监护病区(32) D 心胸外科病区(4)、神外病区(12)、骨二病区(13,20)、急诊二病区(22)、门诊肾脏(33) E 呼吸科监护病区(7)、急诊二病区(28)、肾脏病区(48) F 呼吸科病区(2,46)、移植三病区(34) G 呼吸科(27)、外科ICU病区(37)、外四病区(42) H 心胸外科(3)、门诊呼吸科(25) I 心胸外科二病区(38) J 外四病区(40) K 呼吸科监护病区(45,49) L 泌外病区(44) M 九舍十一病区(11)、呼吸科监护病区(18)、外科ICU病区(19,36,43) 2.2 鲍曼不动杆菌的耐药性分析结果 随着广谱抗菌药、免疫抑制药和糖皮质激素在临床上的广泛应用，以及在选药过程中的认识不足，导致不动杆菌产生的耐药性发生了变化，对常用抗菌药物的耐药性呈上升趋势，表现为多重耐药。从表2中的资料可以看出：鲍曼不动杆菌对氨苄青霉素、头孢唑啉、头孢克罗具有高度耐药性，这与有关文献的报道基本吻合。但对阿米卡星、亚胺培南敏感性较强。 表2 51株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的耐药性 抗菌药物 耐药菌株数 (%) 敏感菌株数 (%) 中介菌株数 (%) 阿米卡星 庆大霉素 甲氧西林 优立新 哌拉西林 头孢唑啉 头孢克罗 头孢呋辛 头孢噻污 头孢他啶 亚安培南 环丙沙星 复方新诺明 17 (33.3) 28 (54.9) 50 (98) 19 (37.3) 29 (56.9) 51 (100) 50 (98) 40 (78.4) 27 (52.9) 24 (47.1) 17 (33.3) 28 (54.9) 29 (56.9) 34 (66.7) 23 (45.1) 0 (0) 25 (49) 13 (25.5) 0 (0) 0 (0) 7 (13.7) 5 (9.8) 27 (52.9) 34 (66.7) 23 (45.1) 22 (43.1) 0 (0) 0 (0) 1 (2) 7 (13.7) 9 (17.6) 0 (0) 1 (2) 4 (7.9) 19 (37.3) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 2.3 将51株鲍曼不动杆菌的科室来源、基因同源性及耐药性综合起来作树状图如下： 图3 51株鲍曼不动杆菌的树状图 经过分析可以看出，1、6、16、17、18、19、28、29、36、42、43、45、51这13株菌的耐药谱为同一类型，对实验中所用的抗生素均耐药，为优势谱；其中6、17、18、29、45号菌株均来自呼吸科监护病房，并且6和17号菌株基因分型均为A型。这说明这段时间内，这种鲍曼不动杆菌在呼吸科监护病房内有小范围暴发流行。 3． 讨论 鲍曼不动杆菌属非发酵菌，不动杆菌属，是唯一能在人类皮肤表面生存的革兰阴性杆菌。它在环境中广泛存在，通常是共生菌，故混合感染多见，不同地区、医院、ICU的检出率各不相同，但都提示其在感染致病中有一定的重要作用。临床分离菌株的基因同源性分析以及耐药性分析对于流行病学调查，特别是传染源和传播途径的追踪具有重要意义[4]。 本实验中，51株鲍曼不动杆菌分为13个基因型，占分析菌株总数最多的型别A型共16株，分布于移植三病区、呼吸科监护病区、血液科病区、外科ICU病区、急诊ICU病区、感染科病区、呼吸科病区、感染科二楼、心胸外科二病区、急诊内科、灼伤病区共11个病区，提示该菌株为主要的流行株，其余均为散发菌株。在院内感染病例流行强度监测中，短期内有3例同源病原体的感染即可判断为医院感染暴发[5]。在大型综合性教学医院里，医护人员，专科治疗的患者等流动人员均有传播病原菌的可能。此外，如果诊疗器材消毒不彻底，也可引起病原体医源性传播。这次调查中，呼吸科监护病区和感染科病区分别分离出了四株A型菌，肾脏病区和外科病区分别分离出了2株C型菌，外科ICU病区分离出了3株C型菌，说明同一科室不同患者间存在交叉感染，可能的原因为医疗护理过程中直接或间接传播。但本次调查未对相关科室进行医务人员手、环境和相关医用器材鲍曼不动杆菌携带和基因分型的调查，因此对于流行和发生交叉感染的病原体不能确定其确切传播途径。 耐药性方面，鲍曼不动杆菌对目前使用的大多数抗菌药物都产生耐药，包括氨基糖苷类、喹诺酮类和广谱的β-内酰胺类抗菌药物。绝大多数菌株对头孢菌素耐药，对青霉素类的耐药率也在逐年上升。全球性细菌耐药检测研究表明，不同地区的菌株对抗生素的敏感性存在差异，就是在同一所医院不同科室耐药谱也有所不同，这与环境和抗生素使用模式有很大关系。鲍曼不动杆菌的耐药机制主要为通过质粒介导、染色体突变、青霉素结合蛋白(PBPs)的改变使抗菌药物失去活性；基因型和耐药型有一定的相关性，菌株获得耐药基因成分如质粒、转座子等使得耐药性高的同时，基因型的条带也多而复杂[6]。本次调查中的51株鲍曼不动杆菌中，对氨苄青霉素、头孢唑啉、头孢克罗、头孢呋辛具有高度耐药性，但对阿米卡星、优立新、亚胺培南敏感性较强，因此可以将它们作为抗菌治疗的首选药。 综上所述，在医院中必须要加强医护人员的无菌观念，严格遵守操作规范，一旦发现多重耐药菌株感染的患者应严加隔离，以阻止该菌株的暴发流行。目前鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物呈现不同程度耐药，且有上升趋势，甚至出现多重耐药，值得加以重视。临床医生应根据临床微生物的药敏试验结果以及药物的药动学和本地区的用药特点综合考虑来合理用药，以达到杀灭病菌和控制感染的目的。 [参考文献] [1] 吴劲松，卢月梅，吴伟元，等．鲍曼不动杆菌的感染分布及耐药性分析[J]．中国感染控制杂志，2004，3(3)：247—249． [2]王凌伟，陈升汶．不动杆菌微生物学耐药研究新进展[J]．国外医药抗生素分册．2004，25(3)：134—137． [3] Snelling, A. M., P. Gerner-Smidt, P. M. Hawkey, J. Heritage, P. Parnell, C. Porter, A. R. Bodenham, and T. Inglis. Validation of use of whole-cell repetitive extragenic palindromic sequence-based PCR (REP-PCR) for typing strains belonging to the Acinetobacter calcoaceticus-Acinetobacter baumannii complex and application of the method to the investigation of a hospital outbreak[J]. J. Clin. Microbiol. 1996.34(5):1193–1202. [4] David M. L., Jose´ M. C., Berta Becerril, Lucila Cuberos. Trinidad Prados, Carlos Ortíz-Leyba, Elías Canas, and Jero´nimo Pacho. Comparison of a Repetitive Extragenic Palindromic Sequence-Based PCR Method and Clinical and Microbiological Methods for Determining Strain Sources in Cases of Nosocomial Acinetobacter baumannii Bacteremia[J]. J. Clin. Microbiol, 2002.40(12):4571–4575. [5] 中华人民共和国卫生部．医院感染管理办法[s]．北京，2006． [6] 练向群，林亚雷，刘丁，等．重复片段引物PCR用于鲍曼不动杆菌分型研究[J]．第三军医大学学报，2002，24(4)：437—438． |
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