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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切 两酶之间最短距离
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翅膀9889

铜虫 (初入文坛)

[交流] 双酶切 两酶之间最短距离

我想自己设计合成一段DNA，内部含两个酶切位点，那么这两个位点距离有什么样的要求？

另外，这段DNA用来接入到3.5Kb的载体上，片段长度有什么样的要求？
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1楼 2009-05-25 00:42:01
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎回帖交流！ 5-27 17:11
酶切位点距离倒没有明文规定相差多少,但是一般来说不 应该小于至少6bp,但是一般来说你接入的外源片断不会有这么小.外源片断的接入要看载体的容量,有些载体可以容下比自身大几倍的外源片断,但是有的就不行.
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52187644
2楼2009-05-25 07:32:53
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
具体两个酶切位点间的距离可以参考NEB公司的说明书（公司主页上就有），上面详细介绍了每种酶最少的保护性碱基数，只要不低于这个数就应该可以了。
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3楼2009-05-26 17:13:42
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jqq1985

银虫 (正式写手)
不要太近就行了（>6bp）
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4楼2009-05-26 19:25:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
其实如果你想合成再插入
建议合长一点多创造几个酶切位点，以后可以用
另外，过短的片段的连接会比较困难，往往要用最好的酶4度连过夜甚至24h才能有较多的阳性克隆长出来
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5楼2009-05-26 21:01:27
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