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xissy

铜虫 (小有名气)

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[交流] 哺乳细胞表达蛋白实验规范

求教各位大神，我们实验室做的哺乳细胞瞬时表达，一般只能做4-5一天。实验室条件不好，也不知道控制的度在哪里，例如是否所有试剂都要买进口的，例如所有水要用注射用水等等。请假各位大神帮忙分析原因。先说明一下我们的基本操作。
1.培养基试过很多，Invitrogen的Freesytle293，OPM，欧文，Acro，Highclone等等。一般会自己配置谷氨酰胺。之前就是用的常规试剂谷氨酰胺和去离子水。请问这一步是否需要用专门细胞培养的液体谷氨酰胺呢？进一步，涉及细胞表达的试剂，都需要购买细胞培养级别的吗？
2.转染试剂用的PEI，之前也是用去离子水配制的，是否应该用注射用水配制呢？
3.我们用的培养瓶是蜀牛的三角瓶，泡酸。一般1年换一次酸。这个中间需要注意什么吗？
4.我们的培养瓶和养昆虫的细胞培养瓶是共用的，一起泡酸。请问可以吗？
目前只想到这么多。谢谢各位！

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