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[求助]
蛋白纯化 已有1人参与
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我最近在表达白蛋白 ，遇到了些困难，求助大家，蛋白一过柱就开始结晶，出现絮状物，以下是我的步骤，不知道什么原因，请大家帮我分析下1、在250ml培养基加入IPTG诱导3小时后，5500g，离心20min后，收集菌体沉淀 2、10mlPBS+ 8ul的溶菌酶溶解菌体，室温放置3小时 3、超声裂解菌体：强度70%，超声30分钟，冰上操作 4、离心，12000rpm，20分钟 5、弃上清（A），收集沉淀，放入-80°（包涵体表达） 6、从-80°冰箱取出菌体，加入5ml的裂解液，室温放置3小时 7、离心，12000rpm，离心20min，收集上清，用0.22um过滤器过滤，得到上清（B） 再次去过柱，发现依然很多结晶，之后没有继续操作。我纯化蛋白卡在上柱这一步，后面的洗液还没用到，因此我分析原因，是我蛋白样品的问题，即与镍柱接触后，开始结晶析出。上清（B）与上清（A）相比，颜色稍黄，出现了少量气泡，是否与此有关？ 发自小木虫Android客户端 |
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