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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切后目的基因与载体PK18总是连接不上
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天堂魔鬼

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2019-06-13 17:11:51
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ken19860823

木虫 (正式写手)
哪两个酶，载体 片段浓度？

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做基因修饰的老菜鸡
2楼2019-06-13 21:13:42
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
无缝克隆往上做吧

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3楼2019-06-13 21:49:37
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xxh1989

新虫 (小有名气)
目的基因过夜酶切切碎了没

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4楼2019-06-13 22:57:26
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目的基因为什么要切过夜呢？回收以后测定浓度了吗？片段酶切以后跑胶了吗？载体与目的基因的摩尔比按1:3到1:10加。如果载体上切下来的片段小于100bp，酶切后的目的基因产物和载体片段都可以用PCR产物回收试剂盒回收。连接为什么不同T4连接酶呢？你的连接有什么特殊的要用Solution I ?
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5楼2019-06-14 08:29:44
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天堂魔鬼

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6楼2019-06-16 17:07:13
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