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努力飞的燕子

新虫 (小有名气)

[求助] 考马斯亮蓝测定蛋白质标准曲线拟合不好已有1人参与

配置的考马斯溶液在595nm下吸光值就0.7。加入0.2mg/ml的牛血清蛋白质溶液1ml,并且加入2ml考马斯溶液,吸光值在2.2左右。导致所测标曲线性拟合差。想咨询下各位虫友,是我考马斯亮蓝溶液配置有问题吗?我该如何改善呢?

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xiaomu321

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
配置没问题,是你制作标曲有问题。配置的考马斯溶液在595nm下吸光值就0.7说明配的很好,(一般0.6-0.8)。
标曲制作:5ml考马斯溶液+1ml牛血清蛋白质溶液, 牛血清蛋白质溶液建议配成1mg/ml,稀释使用减少误差。
一般都是测5个点,我是测9个(0.1-0.9)然后去除拟合不好的。
2楼2019-06-08 13:13:11
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xiaomu321

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaomu321 at 2019-06-08 13:13:11
配置没问题,是你制作标曲有问题。配置的考马斯溶液在595nm下吸光值就0.7说明配的很好,(一般0.6-0.8)。
标曲制作:5ml考马斯溶液+1ml牛血清蛋白质溶液, 牛血清蛋白质溶液建议配成1mg/ml,稀释使用减少误差。
一 ...

百度上有很多方法,很详细,建议先看看再继续测。另外BSA买别人配置的液体标准品会更准确一些
3楼2019-06-08 13:16:45
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努力飞的燕子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaomu321 at 2019-06-08 13:13:11
配置没问题,是你制作标曲有问题。配置的考马斯溶液在595nm下吸光值就0.7说明配的很好,(一般0.6-0.8)。
标曲制作:5ml考马斯溶液+1ml牛血清蛋白质溶液, 牛血清蛋白质溶液建议配成1mg/ml,稀释使用减少误差。
一 ...

我看小木虫上别人的数据,就是标准曲线空白样的吸光值在0左右是怎么回事呀?

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4楼2019-06-08 16:22:22
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