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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 考马斯亮蓝测定蛋白质标准曲线拟合不好
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努力飞的燕子

新虫 (小有名气)

[求助] 考马斯亮蓝测定蛋白质标准曲线拟合不好 已有1人参与

配置的考马斯溶液在595nm下吸光值就0.7。加入0.2mg/ml的牛血清蛋白质溶液1ml，并且加入2ml考马斯溶液，吸光值在2.2左右。导致所测标曲线性拟合差。想咨询下各位虫友，是我考马斯亮蓝溶液配置有问题吗？我该如何改善呢？

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1楼 2019-06-07 23:00:08
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xiaomu321

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
配置没问题，是你制作标曲有问题。配置的考马斯溶液在595nm下吸光值就0.7说明配的很好，（一般0.6-0.8）。
标曲制作：5ml考马斯溶液+1ml牛血清蛋白质溶液, 牛血清蛋白质溶液建议配成1mg/ml，稀释使用减少误差。
一般都是测5个点，我是测9个（0.1-0.9）然后去除拟合不好的。
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2楼2019-06-08 13:13:11
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xiaomu321

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaomu321 at 2019-06-08 13:13:11
配置没问题，是你制作标曲有问题。配置的考马斯溶液在595nm下吸光值就0.7说明配的很好，（一般0.6-0.8）。
标曲制作：5ml考马斯溶液+1ml牛血清蛋白质溶液, 牛血清蛋白质溶液建议配成1mg/ml，稀释使用减少误差。
一 ...

百度上有很多方法，很详细，建议先看看再继续测。另外BSA买别人配置的液体标准品会更准确一些
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3楼2019-06-08 13:16:45
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努力飞的燕子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaomu321 at 2019-06-08 13:13:11
配置没问题，是你制作标曲有问题。配置的考马斯溶液在595nm下吸光值就0.7说明配的很好，（一般0.6-0.8）。
标曲制作：5ml考马斯溶液+1ml牛血清蛋白质溶液, 牛血清蛋白质溶液建议配成1mg/ml，稀释使用减少误差。
一 ...

我看小木虫上别人的数据，就是标准曲线空白样的吸光值在0左右是怎么回事呀？

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4楼2019-06-08 16:22:22
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