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【整理总结】组织培养中的清洗与消毒
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内附【细胞生物学、细胞培养、神经干细胞实验方法】清洗 一、玻璃器皿的清洗： 一般玻璃器皿的清洗包括以下几个步骤：浸泡、刷洗、浸酸、冲洗四个步骤 浸泡： 一般初次使用和培养用后的玻璃器皿都需要先用清水浸泡，以便软化和清除附着物，新的玻璃器皿，玻璃面常带有很多干涸的灰尘，同时在生产过程中，玻璃表面常呈碱性并带有一些对细胞有毒的物质，如铅和砷等。新的瓶子使用前应先用自来水简单冲洗，然后用稀盐酸（5%）浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。培养后的玻璃皿往往附着有大量的蛋白质，干涸后不易刷洗掉，故用后要立即浸入清水中；注意让水能完全进入瓶皿中，不应留有气泡。（Libertad： 我们实验室一般直接加入洗涤剂直接浸泡过夜）。 刷洗： 浸泡后的玻璃皿一般仍要用毛刷沾着洗涤剂刷洗，除去较牢固的杂质，刷洗的次数太多，会损害器皿的光泽度，所以要选用软毛刷和优质的洗涤剂，不能使用含沙粒的去污粉，刷洗的时候要特别注意瓶角的位置（Libertad：洗涤剂可选用洗洁精或者洗衣粉） 浸酸： 刷洗不掉的极微量杂志经过硫酸和重铬酸钾清洁液浸泡剂的强氧化作用后，可以被除掉，清洁液对于玻璃器皿无腐蚀作用，去污能力很强，是清洗过程中极为关键的一环。清洁液由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按照一定的比例配制而成。浸泡时，器皿应该充满清洁液，勿留有空气。浸泡时间不应低于6小时，一般应浸泡过夜。 清洗液可以根据需要，配制成不同的强度，常用的有以下三种： 【强液】 重铬酸钾 63 g 浓硫酸 1000 ml 蒸馏水 200 ml 【次强酸】 重铬酸钾 120 g 浓硫酸 200 ml 蒸馏水 1000 ml 【弱酸】 重铬酸钾 100 g 浓硫酸 100 ml 蒸馏水 100 ml 注：配制时应注意安全，穿戴耐酸手套和围裙。保护好面部等身体裸露的部分。配制时应先使重铬酸钾溶于水中（有时可能不会完全溶解），然后缓缓加入浓硫酸，此时产生的热可以有助于重铬酸钾的溶解。配成后的清洁液一般呈棕红色，经长时间使用后，因有机溶剂和水分增多逐渐会变成绿色，表明已经失效，要重新配制。旧的清洁液仍有一定的腐蚀作用，用后应妥善处理。（Libertad：一般选用配制强酸，废弃失效的清洁液可深埋土中）。 冲洗： 刷洗浸酸后都必须用水冲洗，使之不留任何残迹。可用洗涤装置冲洗。如用手工操作的话，每个瓶子都需灌满水，倒掉，重复10次以上，最后用蒸馏水漂洗2~3次，烘箱烘干备用。 二、胶塞的清洗 组织培养中用到的胶塞初次使用时带有大量的滑石粉，应先用自来水冲洗，再进行常规清洗。常规清洗的方法：每次用后的胶塞要置入水中浸泡，然后用2%NaOH煮沸10~20分钟，除掉培养中的蛋白质。自来水冲洗，然后用1%的稀盐酸浸泡30分钟，最后用自来水和蒸馏水冲洗2~3次。（Libertad：常规清洗的方法这里描述的相对繁琐，我们一般直接加入洗洁精浸泡后，用毛刷刷洗，然后清水冲净，最后用三蒸水冲洗3遍，未出现问题）。 三、塑料器皿的冲洗： 一般第一次使用的塑料器皿均已经过消毒灭菌密封包装好的，使用时直接打开包装使用即可。需要重复使用的塑料器皿，一般还可使用2~3次，不宜过多，塑料器皿一般不宜使用毛刷刷洗，造成清洗困难。因此刷洗的时候的杂质可用脱脂棉拭掉，用流水冲洗干净，晾干，在用2%的NaOH浸泡过夜，然后用5%的盐酸浸泡30分钟，最用用清水和蒸馏水漂洗干净，晾干备用。（Libertad：前述步骤比较是书上规范的操作过程，在实践中，我们发现如果实验经费有限，要重复使用的话，可以用软毛刷加洗洁精谨慎刷洗后，清水冲净，三蒸水冲洗，最后用灭菌锅消毒灭菌处理即可使用） 四、包装 包装的目的是防止消毒灭菌后再次遭受污染。所以培养用品在消毒灭菌处理前要经过严格包装。清洗后的器皿烘箱中烘干后可用包装纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制玻璃或金属制的消毒桶（一般放吸管）包装起来。有字的纸和棉纸不宜做包装使用。 【局部包装】较大的器皿、滤器，消毒筒等只要把瓶口部分用硫酸纸包裹后，再罩以牛皮纸或棉布密封起来用线扎紧。 【全包装】较小的器皿、注射器、金属器械和胶塞等，多使用全包装，现在多采用装入铝饭盒的方法。吸管在装入消毒筒前，应该先使用少许的脱脂棉将吸管接口端堵塞，松紧度适宜；过度易脱落，过紧不透气，影响使用。然后装入消毒筒中；消毒筒的底部应该垫上软纸或者棉花以防止吸管装入的时候折断管尖；最后再包装入筒中封口。（LIbertd：对于瓶子，可使用锡箔纸包裹瓶口后，用牛皮纸扎紧，放入自制的布袋子包裹。离心管等较小的器皿可放入铝饭盒中，再用布袋子包裹。200ul、3000ml 1ml的枪头可在枪头盒中装好后，用白纸包裹，再用布袋子包裹。） 消毒： 消毒的方法因物品不同而异。消毒方法分为三类：物理消毒法，包括紫外线、干热、湿热（高压蒸汽）、离心、过滤以及射线等手段；化学灭菌主要指化学消毒剂等。 |
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2019-05-27 17:59:18, 69.72 K
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