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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » RCA产物出现絮状沉淀
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小路...

新虫 (小有名气)

[求助] RCA产物出现絮状沉淀 已有1人参与

如题，最近做滚环扩增，phi29做的，37度反应2h，65度失活10min，会出现白色絮状沉淀，但是失活phi29之前肉眼是看不到白色絮状物的，求各位大神指点，不甚感激！
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1楼 2019-05-20 22:06:58
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moment8131

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
具体条件是什么，如果浓度较高，出现沉淀是正常的
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一瞬间，我就成了你
2楼2019-05-21 18:18:55
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小路...

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by moment8131 at 2019-05-21 18:18:55
具体条件是什么，如果浓度较高，出现沉淀是正常的

50uL反应体系加10U phi29, 0.2mg/mLBSA, 0.2mM dNTPs, 环探针和引物浓度1:1，用10nM和100nM都试过，30度反应1h, 均有白色絮状沉淀
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3楼2019-05-21 22:29:21
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)
絮状沉淀应该是失活后的BSA

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低调务实！
4楼2019-05-26 11:53:16
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小路...

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2019-05-26 11:53:16
絮状沉淀应该是失活后的BSA

楼主做过单独的BSA失活会出现絮状物吗？
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5楼2019-05-26 14:55:05
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西贝yoo

新虫 (初入文坛)
想问下楼主  合成环状DNA后是如何对环状DNA纯化的？  我试了直接乙醇沉淀，然后用nanodrop测浓度 发现浓度竟然高达3000多ng/ul，可能是外切酶酶切后产生很多单核苷酸，但是这样就没办法准确的知道合成的环状DNA的浓度了

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6楼2020-10-11 13:59:13
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光未暗

新虫 (初入文坛)
你好 我的滚环扩增一直扩不出来 可以跟你交流一下吗

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7楼2023-10-06 10:46:20
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fordreamnju

铁杆木虫 (正式写手)
楼上实验做的怎么样？我也是做不出来

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8楼2024-06-17 12:47:05
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