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小路...

新虫 (小有名气)

[求助] RCA产物出现絮状沉淀 已有1人参与

如题,最近做滚环扩增,phi29做的,37度反应2h,65度失活10min,会出现白色絮状沉淀,但是失活phi29之前肉眼是看不到白色絮状物的,求各位大神指点,不甚感激!
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moment8131

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
具体条件是什么,如果浓度较高,出现沉淀是正常的
一瞬间,我就成了你
2楼2019-05-21 18:18:55
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小路...

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by moment8131 at 2019-05-21 18:18:55
具体条件是什么,如果浓度较高,出现沉淀是正常的

50uL反应体系加10U phi29, 0.2mg/mLBSA, 0.2mM dNTPs, 环探针和引物浓度1:1,用10nM和100nM都试过,30度反应1h, 均有白色絮状沉淀
3楼2019-05-21 22:29:21
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

低调务实!
4楼2019-05-26 11:53:16
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小路...

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2019-05-26 11:53:16
絮状沉淀应该是失活后的BSA

楼主做过单独的BSA失活会出现絮状物吗?
5楼2019-05-26 14:55:05
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西贝yoo

新虫 (初入文坛)

想问下楼主  合成环状DNA后是如何对环状DNA纯化的?  我试了直接乙醇沉淀,然后用nanodrop测浓度 发现浓度竟然高达3000多ng/ul,可能是外切酶酶切后产生很多单核苷酸,但是这样就没办法准确的知道合成的环状DNA的浓度了

发自小木虫Android客户端
6楼2020-10-11 13:59:13
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光未暗

新虫 (初入文坛)

你好 我的滚环扩增一直扩不出来 可以跟你交流一下吗

发自小木虫IOS客户端
7楼2023-10-06 10:46:20
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fordreamnju

铁杆木虫 (正式写手)

楼上实验做的怎么样?我也是做不出来

发自小木虫IOS客户端
8楼2024-06-17 12:47:05
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