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张章一

新虫 (小有名气)

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[求助] 细胞冻存的具体操作步骤已有2人参与

细胞冻存具体操作步骤

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1楼 2019-05-18 09:20:49

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Flyme508

金虫 (小有名气)

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专业: 免疫生物学

【答案】应助回帖

将所需的完全培养基放在培养室室温预热30min后开始复苏。复苏步骤：先准备37度温水，将细胞从液氮罐取出，观察管内无液氮的情况下，捏住管盖，将细胞冻存部分浸入温水轻轻摇晃，一分钟左右细胞将会融化。融化完全后立即终止水浴，直接在冻存管内将细胞离心。离心转速以离心力100g(约900rpm)左右，1min为宜，不同离心机会有差异。离心完成后，弃冻存液，用刚才预热的培养基缓慢加入冻存管，并轻柔重悬细胞后接种至T25或者10cm皿中。显微镜下观察细胞并拍照留存，第二天再观察细胞。要求整个复苏过程时长不超过5min，吹打细胞尽量轻柔，且不能有大量气泡。