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czbd2016

铜虫 (小有名气)

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[交流] 关于游离DNA的沉淀浓缩

我想浓缩一下双酶切后的游离DNA,然后进行琼脂糖电泳，操作步骤如下：
1.加入1/10体积的醋酸钠，轻柔混匀。
2.加入2倍体积的95%得乙醇，冰浴30分钟。
3.19000RPM离心10分钟。
可是一点沉淀也没有，同时进行的还有质粒DNA的沉淀浓缩，也是没有沉淀

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1楼 2019-05-10 08:58:02

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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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你在第二步应该加入100%的无水乙醇或者等体积的异丙醇，在-70度放置30min或者-20度2-3小时。同时还要注意醋酸钠的PH值应该是5.2。我经常这样沉淀，都能沉下来。看到好多人推荐用冷冻干燥仪，也有同学提到BIOG DNA BLOOD ISOLATE KIT技术，我觉得这两种方法都可以试试，看看哪种效率更高一下

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2楼2019-05-10 16:48:06

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北林绾

新虫 (初入文坛)

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czbd2016(金币+1): 谢谢参与

引用回帖:

2楼: Originally posted by 宇宙小妖怪 at 2019-05-10 16:48:06
你在第二步应该加入100%的无水乙醇或者等体积的异丙醇，在-70度放置30min或者-20度2-3小时。同时还要注意醋酸钠的PH值应该是5.2。我经常这样沉淀，都能沉下来。看到好多人推荐用冷冻干燥仪，也有同学提到BIOG DNA B ...

加醋酸钠有什么作用呢？

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4楼2019-08-23 10:21:09

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miaojiabing3楼

2019-05-10 20:12 回复

czbd2016(金币+1): 谢谢参与