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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 2000+bp的DNA片段连不到P-EASY载体上
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五颗梨子

新虫 (初入文坛)

[求助] 2000+bp的DNA片段连不到P-EASY载体上 已有1人参与

从去年九月份到现在，一直没有成功过。
从cDNA中提取目的片段大概2000+bp
然后和18T载体连接
25度和37度连接都试过了，
转到菌落里放在氨苄板上过夜培养可以长出菌落
可是用taq酶做菌落PCR一直显示假阳性
救救孩子叭

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1楼 2019-04-20 17:44:24
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KM石头

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-22 22:34:02
楼主，你要说清楚你的实验过程，你使用的试剂及其厂家，反应体系及反应条件。别的不清楚，不过总出现假阳性，是不是使用的水污染了（反应体系中的水及溶解引物的水）

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2楼2019-04-21 23:20:21
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好运连连OK

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-22 22:34:17
直接挑几个单克隆摇菌送测序公司测序，或者给测序公司送平板让他们菌检测序

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3楼2019-04-22 10:51:42
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macgray1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-22 22:34:30
你可以做个阳性对照看看，或者试试长度小的片段，先确定出原因，一步步排查
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4楼2019-04-22 16:21:20
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