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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

[交流] 求助:关于蛋白质电泳结果的奇怪现象

最近在做一个蛋白的表达,分子量为80多KDa。跑胶所用胶浓度为12%,
与对照相比,发现诱导后的样在80多KDa的地方跑出一条较粗的月亮状条带,凹口朝上,而其下有一段区域没有条带。也就是说中间出现了一段空白。
不知道各位虫友在试验中是否出现了这种情况,特别是表达分子量较大蛋白的时候。


我估计大致原因是我的目的蛋白表达量较大,分子量较大,将一些蛋白阻拦在80KDa的地方,所以我重新做10%的胶,重新点样,另外将样稀释一倍后也点了几个样,发现没稀释的样现象没变化,稀释的样,多跑出了3条带,但中间依然有一段空白。现在我该怎么办,不会继续稀释我的样吧,而且我的样其他条带在浓度上大致和对照差不多。

说了那么多不知道表达清楚没有。望各位达人多多指教。
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Thank-you,so-blue.
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lsbrc

银虫 (小有名气)

上图。。。。。。
2楼2009-05-18 12:27:44
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lifefamily

无图无真相
3楼2009-05-18 13:14:33
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

引用回帖:
Originally posted by lsbrc at 2009-5-18 12:27:
上图。。。。。。

图片不是很清晰。自左至右,maker,2.3为对照.4.5为重组菌诱导却没表达(听人说正常)6.无法解释样
Thank-you,so-blue.
4楼2009-05-18 13:55:27
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

引用回帖:
Originally posted by lifefamily at 2009-5-18 13:14:
无图无真相

10%的胶跑,没多大改观。
Thank-you,so-blue.
5楼2009-05-18 13:59:08
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zt19820823

金虫 (小有名气)

★
susizheng(金币+1,VIP+0):我是直接煮的样。 5-18 14:58
我也跑过这么奇怪的电泳 前半截是好的 后面就不行了
我当时是用的盐析 透析不彻底的话就会出现这种情况
如果你也用的盐析 尝试透析得彻底一些
6楼2009-05-18 14:50:54
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zt19820823

金虫 (小有名气)

★
susizheng(金币+1,VIP+0):恩,马上试试。 5-18 14:58
哦 还有 可能有颗粒较大的物质
上样前过个膜应该会好一些
7楼2009-05-18 14:53:03
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zt19820823

金虫 (小有名气)

要是还不行的话就离以下心
效果应该比过膜好
8楼2009-05-18 15:43:17
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

★
susizheng(金币+1,VIP+0):应该不会吧,配方都是很固定的,以前也都跑过,没问题。 5-18 17:35
盐浓度过高了
9楼2009-05-18 17:30:44
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

★
susizheng(金币+1,VIP+0):恩,重新用更低浓度胶试试。 5-18 22:16
试试更低的浓度的胶,如果还是不行的话,就纯化一下蛋白
会当凌绝顶,一览众山小
10楼2009-05-18 19:37:06
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