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【求助】金币求助柱层析问题（霉菌色素分离）
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【求助】金币求助柱层析问题（霉菌色素分离） 本人做一种霉菌中的色素分离（不是红曲霉素），色素的相似组分很多，可能是一些结构类似物，柱层析分离时出现很多问题。 柱层析条件：硅胶【200-300目】，洗脱剂【石油醚-丙酮】，湿法装柱, 湿法上样。 问题： 1，洗脱剂的选择：我是通过tlc确定的洗脱剂，很多文章里面说用TLC跑时Rf为0.2-0.3的展开剂稀释一倍作为洗脱剂。但是否要求TLC 中Rf为0.2-0.3时，能够将各种产物的点分开？ 2，TLC监测：洗脱下的样品溶在洗脱剂中，我用TLC法点板，可是跑出来的东西总是一条带（展开剂为氯仿-丙酮=9：1），可不可以将带形相似的样品溶液合并再用柱层析细分？或者再一次优化展开剂，使样品能够在板上分离，然后再指导合并？（优化展开剂很困难，所以不想这样，但是想问一下前辈，这是否是必须的） 3，柱层析初次分离后，打算合并细分。是否可用紫外分光光度计对收集的各管溶液进行全波长扫描，将最大吸收峰在同一波长处的溶液合并？ |
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gyp1271985
木虫 (著名写手)
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2楼2009-07-17 14:03:07
小药虫
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3楼2009-07-17 14:22:59
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 7-17 21:17
hkfgwww(金币+1,VIP+0): 8-17 19:04
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 7-17 21:17
hkfgwww(金币+1,VIP+0): 8-17 19:04
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RF值0.2-0.3指对你分离的样品，并不是所有的都能都分开，如果你的目标化合物和杂质点挨得很近极性要调小，rf值最好0.1左右，另外还与你硅胶长度有关，较难分离时硅胶长度可以选择适当长点。 跑出的点是一条带情况可能是你点的样太浓亦或是你的目标化合物带羧基或氨基可以向展开剂中加入适量的甲酸或者三乙胺。如果未纯可以重新分离，进行梯度洗脱。 细分后不必要对每管样品扫描，即使紫外吸收一样也不一定是同一化合物，可以在TLC上多次展开或者用不同展开体系展开，如果是一个点可以初步确定为同一物质。 |
4楼2009-07-17 14:29:05