24小时热门版块排行榜

返回列表

阳光雨露118

新虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 945.8
红花: 1
帖子: 438
在线: 41.8小时
虫号: 4483116
注册: 2016-03-09
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 做定点突变时连个基因片段融合不了！！！已有1人参与

各位大神：
你们好，我最近在做定点突变，突变位点在基因的中部，做pcr时先p出前部分基因片段和后部分片段，然后利用PCR将前部分和后部分基因片段做模板，加入上下游物做融合PCR,融合时依据引物Tm值将退火温度设置为71.5度，但总失败，求原因！求指导！！！！

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2019-04-15 17:15:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

蓝韵pretty

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 80.8
红花: 1
帖子: 20
在线: 11.4小时
虫号: 3302268
注册: 2014-07-01
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
阳光雨露118: 金币+20, ★★★很有帮助 2019-04-22 15:15:57

你是做重叠延伸PCR吧？前后片段做胶回收了吗？重叠了多少个碱基呢？退火温度太高了吧？你可以设置一个梯度看看。回收回来的前后片段你可以放在一起延伸之后再以此作为模板，用两端的上下游引物进行扩增。

赞一下

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

阳光雨露118

2楼2019-04-17 08:48:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

阳光雨露118

新虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 945.8
红花: 1
帖子: 438
在线: 41.8小时
虫号: 4483116
注册: 2016-03-09
专业: 微生物生理与生物化学

送红花一朵

引用回帖:

2楼: Originally posted by 蓝韵pretty at 2019-04-17 08:48:39
你是做重叠延伸PCR吧？前后片段做胶回收了吗？重叠了多少个碱基呢？退火温度太高了吧？你可以设置一个梯度看看。回收回来的前后片段你可以放在一起延伸之后再以此作为模板，用两端的上下游引物进行扩增。

谢谢

发自小木虫Android客户端

回复此楼

3楼2019-05-15 10:50:36

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖