| 查看: 370 | 回复: 2 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
氨氧化古菌（AOA）克隆测序问题求助！！！！！！
|
|||
|
我做的是土壤中氨氧化细菌（AOB）和古菌（AOA）对环境变化的响应情况研究 采用的克隆/DGGE的办法检验AOA和AOB的种群结构的变化。AOA的引物有两对，第一对用于克隆测序，并且其产物用第二对引物pcr之后上DGGE.第一步目前遇到超级大麻烦。从来没有遇到过。第一对引物为：A109f/1492r (Grosskopf et al. 1998; Graeme Nicol modified) 1492r-GN GYYACCTTGTTACGACTT A109f ACKGCTCAGTAACACGT 第二对引物为：Cren771/957r + GC (Ochsenreiter et al., 2003) - anneal 55oC Cren16S957r-GC CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCGGCGTTGACTCCAATTG Cren16S771f ACGGTGAGGGATGAAAGCT 做克隆的载体是promega的T-easy,具体问题如下： 做完克隆我用T7,sp6检验过确实有插入片段，然后去测序，结果测了48个样品，才有两个是AOA(NCBI BLAST),以为是我提质粒的问题，所以重新摇菌提质粒，这次用第一对引物PCR,然后用第二对引物确认之后再去测序，而且跑胶检验条带很亮的才去测序，结果还是只有一个是AOA. 因为我这是在国外做实验，测序时，我不但要提质粒，还要准备好测序的产物，即用bigDye做PCR反应。不知道会不会是这个过程中会有污染。 还有就是测序报告说信号很弱，可能是我反应体系加的bigDye比较少吧，不过每管也有1ul-1.5ul，应该不少了，国内很多人做还有更低的。 谁能救我啊！！！  时间和金钱浪费太多了！！！同样条件，我做AOB测序的结果就相对好很多。大多数测序结果都对。 谁人能帮解决这个问题，我可以帮你下资料，呵呵！！！ [ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:58 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿华中农业071010，320求调剂
已经有19人回复
-
304求调剂
已经有7人回复
-
求博导｜生物质基多孔碳/超级电容方向，已有相关成果，寻能源材料/碳材料方向老师
已经有3人回复
-
二苯甲酮酸类衍生物
已经有6人回复
-
接受任何调剂
已经有4人回复
-
一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗
已经有12人回复
-
320求调剂
已经有4人回复
-
295分求调剂
已经有5人回复
-
294求调剂
已经有8人回复
-
山东双非院校考核超级无底线，领导幸灾乐祸，教师遭殃恐
已经有8人回复
3楼2010-02-11 17:15:38
louyiceng
荣誉版主 (知名作家)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 贵宾: 10.921
- 金币: 19042.7
- 红花: 8
- 沙发: 1
- 帖子: 6329
- 在线: 337.6小时
- 虫号: 34457
- 注册: 2004-01-27
- 性别: GG
- 专业: 有机分子功能材料化学
2楼2010-02-11 12:26:19
