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造成western-blot发光时发生荧光淬灭的因素有哪些？
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荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象，即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光，但亮光很快就消逝了，压完片后条带却很弱，甚至没有条带，发生这种情况的原因可能有以下几个方面: 1. 抗体浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致荧光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。 2. 抗体浓度太低，荧光信号太弱，可能第一次压片能够获得很弱的条带，再压片就没有什么条带都没有。 3. 操作时间过长，膜逐渐干掉。避免膜干掉。 4. 不良的实验习惯导致设备或试剂污染。例如铁锈和不慎沾染的显影液、定影液，会造成荧光淬灭，甚至直接导致无荧光； 5.ECL发光液的质量。除过氧化物因接触空气被逐渐还原外，ECL发光液的成分通常都不稳定。建议选择发光稳定的试剂，如Enlight。 |
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