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星庭光耀

新虫 (初入文坛)

[求助] overlap pcr具体过程

最近要合成一个126bp的基因,直接用引物合成不添加模板,老板说用overlap pcr合成。已经设计了一对引物,但是后面用的pcr温度,循环数,酶什么的,保存啊一头雾水(研一刚接触这么东西所以)。有可以给我说说后面具体该怎么操作的大神?

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ideacolin

新虫 (初入文坛)

★ ★
星庭光耀(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-03-27 18:27:00
两条引物中间得有同源序列,所以得合两条大引物,或者三条小引物,退火的时候彼此在末端anneal上,三条引物用退火的方式连接在一起,这样经过PCR反应就能得到一条大的片段,条件跟普通pcr差不多。

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2楼2019-03-27 13:28:10
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