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[求助]
组织外泌体的提取方法求助
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| 我提取组织外泌体，先在研磨机里研磨组织，用70Hz的频率研磨30s/次，中断20s，研磨六次。然后4000g离心30min，除细胞碎片，12000g离心30min，除microvesicle，过0.22um滤膜，PBS稀释至10mL，100000g离心得外泌体（保留这一次的上清液），然后用30%的蔗糖垫100000g提纯外泌体，得到的含外泌体的蔗糖垫层用PBS稀释至10mL，100000g离心得最终的外泌体，RIPA裂解液裂解。然后western blot做外泌体的marker CD9，用第一次的上清做对照。但是出现奇怪的现象，条带在上清里显出来，外泌体里反而没有。想求助是哪一步出了问题，跟研磨组织时的参数有关吗？有没有哪位大侠做过组织外泌体的提取，分享一下经验。谢谢！ |
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