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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 【求助】双缩脲法测多肽的含量标曲的问题
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ljf2608

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】双缩脲法测多肽的含量标曲的问题

我想用双缩脲法测一下多肽的含量，做标曲的时候遇到了问题，想向大家请教一下： 文献中让用标准四肽做，但是由于标准四肽太贵，老师让用谷胱甘肽代替。但是谷胱甘肽的效果太差了，第一次做的时候，浓度太小，第二次的时候，浓度加为2，3，4，5，6，7，8，9mg/ml的时候，开始还有梯度，但是到了5就又开始变小，变得小于0.2了，到了9也就是0.17左右。第三次做的时候浓度为10，20，30，40，50，60，70，80，90mg/ml，结果加入双缩脲试剂后根本没有颜色变化，都是透明无色的，很郁闷。后来细细看了双缩脲的原理，在碱性条件下才能显示紫红色，而我是根据文献报道用三氯乙酸配制的，看来是很大的问题了，但是在测多肽时，也是要用三氯乙酸沉淀蛋白质的啊！希望虫虫们给我一些好的建议。谢谢！

[ Last edited by sugl on 2009-5-14 at 13:30 ]
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1楼 2009-05-14 12:03:03
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sugl

铜虫 (正式写手)
★
ljf2608(金币+1,VIP+0): 5-16 14:33
问题解决了，把解决方式和结果也谈一下吧，与大家共勉。
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6楼2009-05-15 13:29:26
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ice0205

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那你是用水溶然后用BSA做的标曲啊，那这个标曲可以看出多肽的浓度吗，那不是只能是蛋白质的浓度呵呵说的再具体一点吧呵呵谢谢
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10楼2009-07-09 20:49:23
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普通回帖

cljoklh

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
sugl(金币+1,VIP+0):谢谢解答。 5-15 11:18
ljf2608(金币+1,VIP+0):我也尝试了一下BSA是可以的 5-15 11:41
ljf2608(金币+1,VIP+0): 5-16 19:52
ljf2608(金币+1,VIP+0): 5-16 19:53
用双缩脲法测蛋白含量，我们都是用BSA做标准曲线的。
BSA(牛血清白蛋白)。
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2楼2009-05-14 20:22:04
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liuke009

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
sugl(金币+1,VIP+0):谢谢解答。 5-15 11:19
ljf2608(金币+1,VIP+0):谢谢你的建议 5-15 11:41
用简单的标准蛋白做标准曲线，比如BSA之类的，基本上随便一种都行，不用那么复杂
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3楼2009-05-14 20:29:22
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sugl

铜虫 (正式写手)
★
ljf2608(金币+1,VIP+0):是的，你说的很对，我是测多肽的，不是测蛋白质含量的，并且还要把蛋白质沉淀下去。谢谢你 5-15 11:42
好像楼主说的是测多肽，而不是测蛋白，似乎应该有些许不同。我测蛋白也是用的BSA做的标曲。
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4楼2009-05-15 11:20:00
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ljf2608

金虫 (正式写手)
谢谢大家踊跃发言，问题我已经解决了，但是要告诉大家，我做的本来就是错的，谷胱甘肽是不能与双缩脲试剂反应的，所以不显示是正常的。
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5楼2009-05-15 11:44:51
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ljf2608

金虫 (正式写手)
由于标准四肽价格太高，最后选择了谷胱三肽，但由于双缩脲试剂不能和二肽发生反应，因为二肽只有一个肽键；同理，双缩脲试剂也不能与尿素反应，因为尿素的两个-NH2连在同一个硫原子上，不具备两个肽键的基本要求。这个大家可以看一下双缩脲反应原理。后来我又用了BSA做的，不过浓度不能按文献中讲的那么小，浓度适当放大一些，效果不错。
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7楼2009-05-16 14:46:00
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ice0205

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问楼主，你用BSA代替四肽做标曲，用什么溶解的啊？三氯乙酸？可是我试了一下，BSA根本都沉淀了，你用的多少浓度的啊？我做的根本没有梯度，想请教一下你的具体做法，拿来分享一下吧，谢谢了
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8楼2009-07-09 10:18:33
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ljf2608

金虫 (正式写手)
对不起，误导你了，BSA根本不行，TCA 是沉淀蛋白质的，用水溶啊
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9楼2009-07-09 19:43:47
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