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细胞实验重复性差？先看看有没有支原体污染
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当实验结果与预期不一致或无法重复时，先自查——查一下自己的研究样本，特别是细胞培养是否做到位了，其中有“一点”需特别注意，因显微镜下很难观察到它，没有视觉，就没有感知，所以它很容易被忽略。 这“一点”就是：支原体污染！ 全世界范围内，不同实验室的科研人员在培养细胞时，发生支原体污染的概率是10%-85%不等。支原体是最小的原核生物，大约0.2-0.3um, 可以透过滤膜(0.22-0.45 um)，因此被污染细胞常常肉眼观察不到。有的实验室被支原体污染后，如果不进行有效彻底的支原体清除，该实验的细胞培养很难进行下去，细胞传代3代以后状态就急剧下滑，无法进行正常实验，有的实验室甚至只能指望换细胞间。 大量文献报道细胞支原体污染后，会影响DNA 、RNA 和蛋白的表达，进而会产生以下几个方面的影响： 1，细胞生长和繁殖 2，细胞代谢及功能 3，染色体异常 4，免疫细胞的质量 如何与这害人的支原体做斗争? 首先，可对细胞进行支原体污染检测，下面介绍3种方法： 1，PCR法。 若有污染，会P出条带，如果不放心送去测序看看是不是支原体序列。记得那会实验室每周有专人进行全实验室细胞的支原体检测，一发现有问题，马上将其扼杀在摇篮里。但是有时PCR法敏感性差容易出现假阴性结果，或是因为检测范围小不能检测到所有的支原体污染。 2，Hoechst等荧光染色法和酶活法。 Hoechst等荧光染色法需要先将细胞种植在载玻片上，等细胞长到合适的密度，对其进行固定、洗涤、染色等,最终在显微镜下的现象。酶活法是通过检测支原体特异性ATP合成酶来检测支原体的污染，需要特定的试剂盒和相应的多功能酶标仪，而且试剂盒的价格还比较昂贵。这两种方法没有做PCR 来得简单快速。 3，基于先达基因ERA技术的支原体检测试剂盒 ERA是由我国苏州先达基因自主研发的，核心是一套等温核酸扩增组合酶制剂。该试剂盒可以在恒定的低温下（25℃-42℃）对痕量的支原体种内保守性DNA片段进行特异性的扩增，扩增反应可以在20min内完成，该试剂盒检测范围涵盖130种支原体。这可以说是目前最为理想的支原体检测方法了。 。 然后，如果检测到有支原体污染，该如何处理呢? 方法1：直接弃之！ 这就非常简单粗暴了，如果还没做处理，还是赶紧弃之吧，抢救不如重新复苏了，另外对培养箱要做由里至外的清洁处理。 方法2：支原体清除培养基 如果你培养的细胞比较珍贵，直接丢弃可惜，那么在确定对细胞的基因及蛋白表达没有影响的情况下，可以使用——支原体清除培养基 Procell支原体清除培养基 支原体清除培养基是Procell在市面上已有的 支原体清除培养基基础上开发的新一代产品，含有清除“支原体”的特殊成分(一种混合制剂，可通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清除效果，最大程度上挽救珍贵的细胞，减少因支原体污染带来的损失)。 拯救被支原体污染的细胞，你们Get到了吗? 支原体污染不易察觉，但染上却可以毁了全部细胞。为了不让自己输在起跑线上，今后，请在蛋白检测不顺时，多注意下不易察觉的细节如支原体污染，细胞交叉污染，细胞传代次数过多所导致的细胞老化，等等。做科研，细节决定成败! |
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