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别踩我的菜

新虫 (小有名气)


[交流] Taq酶

我们自己纯化的Taq酶用在普通PCR效果很好,酶活都很高,但是做荧光定量,加入sybr green后一点扩增都没有,请问普通的taq酶没法用于荧光定量PCR吗?
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snhajn

新虫 (著名写手)



别踩我的菜(金币+1): 谢谢参与
自己纯化,就是不用买了呗

发自小木虫Android客户端
3楼2019-03-14 23:10:58
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吃瓜的半仙

新虫 (小有名气)


1.首先要确定你的taq酶基因,表达的taq酶有没有5`---3`端的外切酶活性;2.其次用于定量PCR的taq本身纯度要求非常高,降低定量PCR的干扰;3.taq酶体系的优化影响也非常大,主要体现在buffer中成分,或许就可以考虑一下BIODAI的taq酶,效果应该会达到事半功倍的效果。
6楼2019-03-15 16:44:08
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lllilei1986

新虫 (小有名气)



别踩我的菜(金币+1): 谢谢参与
你好,请问你们自己表达的Taq酶是网站上的832个氨基酸那个吗?有没有进行优化,使用哪个载体进行的表达,我最近也要自己做Taq酶,现在大部分公司卖的都是突变之后的,我想问你你是做的哪个酶?谢谢
7楼2021-02-17 16:16:24
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lllilei1986

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 吃瓜的半仙 at 2019-03-15 16:44:08
1.首先要确定你的taq酶基因,表达的taq酶有没有5`---3`端的外切酶活性;2.其次用于定量PCR的taq本身纯度要求非常高,降低定量PCR的干扰;3.taq酶体系的优化影响也非常大,主要体现在buffer中成分,或许就可以考虑一 ...

你好,我看你懂的很多,你知道Taq酶相关资料啥的吗?我也即将开展相关Taq酶的实验,谢谢
8楼2021-02-17 16:17:41
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