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别踩我的菜

新虫 (小有名气)

[交流] Taq酶

我们自己纯化的Taq酶用在普通PCR效果很好，酶活都很高，但是做荧光定量，加入sybr green后一点扩增都没有，请问普通的taq酶没法用于荧光定量PCR吗？
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1楼2019-03-14 16:19:47
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snhajn

新虫 (著名写手)
★
别踩我的菜(金币+1): 谢谢参与
自己纯化，就是不用买了呗

发自小木虫Android客户端
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3楼2019-03-14 23:10:58
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吃瓜的半仙

新虫 (小有名气)
1.首先要确定你的taq酶基因，表达的taq酶有没有5`---3`端的外切酶活性；2.其次用于定量PCR的taq本身纯度要求非常高，降低定量PCR的干扰；3.taq酶体系的优化影响也非常大，主要体现在buffer中成分，或许就可以考虑一下BIODAI的taq酶，效果应该会达到事半功倍的效果。
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6楼2019-03-15 16:44:08
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lllilei1986

新虫 (小有名气)
★
别踩我的菜(金币+1): 谢谢参与
你好，请问你们自己表达的Taq酶是网站上的832个氨基酸那个吗？有没有进行优化，使用哪个载体进行的表达，我最近也要自己做Taq酶，现在大部分公司卖的都是突变之后的，我想问你你是做的哪个酶？谢谢
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7楼2021-02-17 16:16:24
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lllilei1986

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 吃瓜的半仙 at 2019-03-15 16:44:08
1.首先要确定你的taq酶基因，表达的taq酶有没有5`---3`端的外切酶活性；2.其次用于定量PCR的taq本身纯度要求非常高，降低定量PCR的干扰；3.taq酶体系的优化影响也非常大，主要体现在buffer中成分，或许就可以考虑一 ...

你好，我看你懂的很多，你知道Taq酶相关资料啥的吗？我也即将开展相关Taq酶的实验，谢谢
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8楼2021-02-17 16:17:41
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