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pesc-his和pesc-leu质粒在酿酒酵母中的丢失问题
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| 我们在酿酒酵母中做crispr/cas9基因敲入，在p-416质粒上表达cas9(低拷贝，URA筛选标记)，在pesc-his表达了gRNA，成功之后想要把这两个质粒去掉，就在YPD培养过夜，涂布在FOA平板上，p-416的质粒很容易丢失，但是pesc-his的质粒有时很难去除掉，反复在YPD的培养基中培养也不行，按说这种游离的质粒在天然培养基中很容易丢失才对。为了进一步促使pesc-his的丢失，我在该质粒上表达了URA，并验证可以表达，但是在FOA板上长出的菌株中仍然有携带pesc-his质粒的，把pesc-his换成pesc-leu也会出现这种情况，我就很疑惑，请问各位大佬，这是怎么回事呢？谢谢。 |
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