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DHE红色荧光探针测定酵母细胞内ROS水平
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关于用DHE红色荧光探针测定ROS水平,我用的菌种是酿酒酵母(含有pYES2质粒),我实验步骤是这样的: 1.将菌株接到50ml SC-ura培养基中培养36h 2.分装至两个小玻璃瓶中各10ml(加或者不加1mmol过氧化氢),培养1h 3.用PBS漂洗2次,再加入100微升PBS,加入探针1微升,混匀,37° 30min,避光 4.用PBS漂洗2次,加入100微升PBS 5.去20微升于载玻片上,盖上盖玻片,用荧光显微镜观察 结果是用绿光激发后没有红色荧光出现,请问一下我可能是那个步骤出问题了?还有就是有没有人做成功的求分享! |
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