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有养KG-1和THP-1细胞的吗？ 已有2人参与
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有养过KG-1和THP-1细胞的吗？这两株细胞培养条件是不是很苛刻？ 可否交流一下？ |
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Chlo_Q
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http://cache.baidu.com/c?m=9f65c ... 650dbd8cdb&p1=4 生物秀论坛>细胞实验技术>如何养好THP-1细胞 发表于 2007-10-29 13:57 请教 如何养好THP-1细胞 从上海生命科学研究所购买的 开始还可以 过了一段时间就不行了，急急急！！！ 【独狼 生物秀探花 积分15311帖子982】发表于 2007-10-29 15:01 THP-1 细胞是悬浮细胞，相对贴壁细胞要求高一点。细胞养不好，可能的原因有，THP-1细胞特别依赖细胞浓度，ATCC上105到106每ML，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。 1、细胞株的来源很重要，如直接来源于ATCC（American Type Culture Collection 美国模式菌种保藏中心）生命力要强于国内细胞库的 2、注意细胞的密度一定要高，介于5×105 - 106/ML之间，增值的快。细胞数量太少，不适合THP-1生长，一般状态不好的THP-1在培养了3天后数量仍然不多，继续培养一天或者两天，培养基严重泛黄，细胞数量会巨增。这一点不同于同是单核细胞系的U937细胞。 3、THP-1细胞适合在细胞ph环境偏酸环境生长，对培养基变化非常敏感，所以尽量使用相同ph的1640， 4、还要注意，传代后切忌常移出培养箱观察，否则会影响细胞生长，状态变差，一般首先表现为细胞内颗粒变多。一般THP-1生长相当快，对于状态已经不好的情况，建议传代后3～4天再观察，一般4天时间培养基已明显泛黄，细胞数量巨增。 1)THP-1细胞喜欢酸性条件，你不要老是换培养基。越酸的条件，细胞密度越大，细胞就长得越好。 2） 不要频繁换液，一般2-3次换液离心一次（只是补充培养基） 3） 使用1640（ATCC推荐），注意加碳酸氢钠2.5g就可以了，宁酸勿碱 4） 注意冻存的时候密度大些，推荐用血清冻存 5）感觉Hyclone的血清比较好 6）复苏比较慢，建议开始用小瓶，不要用一次性的 http://www.atcc.org/ATCCAdvanced ... emplate=cellBiology ATCC Advanced Catalog Search ? Product Details Propagation: ATCC complete growth medium: The base medium for this cell line is ATCC-formulated RPMI-1640 Medium, Catalog No. 30-2001. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: 2-mercaptoethanol to a final concentration of 0.05 mM; fetal bovine serum to a final concentration of 10%. Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Temperature: 37.0°C Subculturing: Protocol: Cultures can be maintained by the addition of fresh medium or replacement of medium. Alternatively, cultures can be established by centrifugation with subsequent resuspension at 2-4 X 10(5) viable cells/ml. Subcultutre when cell concentration reaches 8X105) cells/ml.Do not allow the cell concentration to exceed 1 X 10(6) cells/ml. Medium Renewal: Every 2 to 3 days Preservation: Freeze medium: Complete growth medium supplemented with 5% (v/v) DMSO Storage temperature: liquid nitrogen vaporhase Doubling Time: approximately 26 hrs |
3楼2011-03-17 13:48:48
Chlo_Q
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