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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 连接转化
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请教各位

新虫 (小有名气)

[求助] 连接转化 已有2人参与

做了两次连接转化，最后菌液pcr检测的时候只有二聚体条带，请问是没连接转化成功吗？有没有什么其他鉴定方法呢？

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1楼 2019-03-11 16:01:21
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wx1308897716

木虫 (小有名气)

神虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你用的什么引物，菌p最好有一条引物是你载体上的，如何不确定连没连上，两条都用载体上的引物，看扩增出来的条带大小就知道连没连上了
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2楼2019-03-11 16:16:59
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请教各位

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wx1308897716 at 2019-03-11 16:16:59
不知道你用的什么引物，菌p最好有一条引物是你载体上的，如何不确定连没连上，两条都用载体上的引物，看扩增出来的条带大小就知道连没连上了

用的是当初pcr跑目的条带的引物

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3楼2019-03-11 22:22:13
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lizimu566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
使用载体的通用引物PCR，可以提质粒酶切验证
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4楼2019-03-12 11:15:03
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请教各位

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lizimu566 at 2019-03-12 11:15:03
使用载体的通用引物PCR，可以提质粒酶切验证

克隆基因，胶回收后连接转化，算质粒酶切吗

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5楼2019-03-12 12:11:53
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lizimu566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 请教各位 at 2019-03-12 12:11:53
克隆基因，胶回收后连接转化，算质粒酶切吗
...

不算啊，用你做PCR的菌液提质粒，在酶切验证
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6楼2019-03-12 14:37:07
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请教各位

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lizimu566 at 2019-03-12 14:37:07
不算啊，用你做PCR的菌液提质粒，在酶切验证...

我就是想单纯的验证一下我的目的基因连接转化到感受态上没，连接转化成功就送去测序了

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7楼2019-03-12 19:35:16
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