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synhily

木虫 (正式写手)

[交流] 有没有什么方法快速提取酵母基因组?

有没有什么方法快速提取酵母基因组?我用普通的方法,要一天才能提好,很慢,如果要提取的数量多则是一件很费力的事情。
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renyjzx2008

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
synhily(金币+3,VIP+0):谢谢了,我先试试,如果可以,全部金币奉送!!! 5-14 18:40
synhily(金币+4,VIP+0):谢谢你的帮助,省了我的大事啦,哈哈 5-18 09:57
分子克隆上没有的,你可以照着这个方法去做:挑取酵母单克隆至含10μLddH2O的PCR管中,加入5μL5U/μL Lyticase混匀,30℃水浴10min,-80℃30min即得酵母基因组DNA。然后可以当模板直接用了,不但省时,而且适合大量样本的提取,效果很好的!
我自己前面做的时候也遇到不少问题,建议你自己多看看这方面的外文献。祝顺利!
8楼2009-05-14 13:04:48
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普通回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)

★ ★
synhily(金币+2,VIP+0):请问有没有摸好的菌落pcr条件啊,我用了一些方法还是不行,酵母细胞壁好厚呀。 5-12 19:30
干吗用
如果只是用PCR的话摸索一下菌落PCR条件吧
2楼2009-05-12 10:32:13
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liuke009

铁杆木虫 (著名写手)

我们组都是用试剂盒提,多用点试剂即可
3楼2009-05-12 10:51:54
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)


synhily(金币+1,VIP+0):我用的是普通的方法,不是快速提取,我想请教的是能破掉酵母细胞壁的方法,也就是菌落PCR前的处理条件。 5-12 19:31
貌似分子克隆这本书上有酵母DNA的快速分离法啊~~~不知你用的是不是这个呵~~~
4楼2009-05-12 16:55:53
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synhily

木虫 (正式写手)

各位有没有做菌落PCR前,处理酵母使其释放DNA的方法呢,这样就不用一整天一整天的提基因组了。谢谢。

PS:直接菌落我已经试过了,没有扩增出来,老师说是酵母细胞壁太厚了,基因组没有释放出来啊。
5楼2009-05-12 19:35:20
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aga0110125

银虫 (小有名气)

如果对基因组完整性要求不高,用热裂解很快,沸水煮个10min吧
6楼2009-05-13 10:57:09
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synhily

木虫 (正式写手)

我煮了 还是没有啊
7楼2009-05-14 11:24:41
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synhily

木虫 (正式写手)

楼上的虫虫能说的再明确些吗?我今天试了一下,没有扩增出来。按照您的方法处理后得到的模版还需要处理一下吗?(比如离心取上清)。模版的体积是全部的15微升还是一部分就够? 谢谢回答。。。
9楼2009-05-15 20:21:23
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)

赞同八楼的说法
Nevergiveup!
10楼2009-05-15 22:28:14
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