| 查看: 217 | 回复: 0 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
luneworchid新虫 (初入文坛)
|
[交流]
煮沸法提取血清HBV DNA相关问题求解，谢谢
|
||
|
我是从一篇博士学位论文《提高乙型肝炎病毒p基因区PCR检测阳性率的策略及阿德福韦醋治疗中HBV基因型耐药临床监测研究》看到，用煮沸法提取血清中HBV DNA：直接沸水浴５ｍｉｎ，然后１５０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，吸上清４ｕｌ作为PCR模板。这篇文献中所提取的HBV DNA的ＯＤ２６０／２８０都是１.８几，浓度大概是５０多（ｕｇ／ｍｌ），他把几种方法做了对比发现，这种煮沸法提取的DNA最多。 我的操作过程是这样的，大约７００ｕｌ血清（HBV-DNA: 7.72×106ｃｏｐｉｅｓ），煮沸了５ｍｉｎ，我觉得太烫了，就在－２０℃放了５ｍｉｎ左右，由于我当时没能换算×ｇ和rpm，所以直接用了１５０００×ｇ离心了５分钟，然后把上清液吸出来保存在－２０℃。 今天测了ＯＤ２６０／２８０只有０.５７，浓度是１０５.９ｎｇ／ｕｌ。上面 请问各位前辈，我的问题出现在哪里？是不是我不该在煮沸后放入－２０℃？是不是我的血清太多了？是不是我的离心速度太大（是不是离心速度过大把蛋白混入了上清液）？ 请各位前辈指点，这样的DNA能否作为明天PCR的模板？如果可以，在２５ｕｌ和１０ｕｌ体系应该分别加多少ｕｌ？ 另外，各种离心速度离心血清时，分别沉淀什么？ 谢谢！非常感谢！！ [ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:04 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
