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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 紧急求助：原核生物的mRNA如何提取？
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ziye1988

新虫 (初入文坛)

[交流] 紧急求助：原核生物的mRNA如何提取？

请各位哥哥姐姐帮忙告诉一下原核生物如大肠杆菌的mRNA的如何提取啊？提取出总的RNA后如何分离mRNA啊？如果用RT-PCR反转录后不同RNA反转录的产物是不是有所不同啊？可不可以在不同的引物上加一个荧光标记从而将其分开啊？
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1楼 2009-05-11 20:16:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
一样也是加trizol去提，收集菌体后加
一定要分离mRNA吗？
总RNA用oligo dt去RT可以满足大多数实验的要求
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2楼2009-05-11 22:10:29
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ziye1988

新虫 (初入文坛)
做原核生物比如大肠杆菌的EST数据库的构建不是需要提了mRNA之后再反转录吗，要是提总的RNA反转录的话就不符合建EST数据库的技术路线了。我想的是在总的RNA反转录时把mRNA的引物上加一个荧光标记，这样RT-PCR出的所有mRNA就都带上了荧光标记，从而分离。但是老师说这个方法回收率太低，我在网上也没查到关于原核生物mRNA分离的方法。在ncbi上的EST数据库里也有原核生物的EST啊，那他们是怎么做的啊?
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3楼2009-05-31 17:38:42
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