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yanlin513

新虫 (小有名气)

[求助] 引物设计求助 已有1人参与

1.
第一个引物设计
F-primer: 5'  GGG GGTACC ATGGGGAGATTGAGATTAGC  3'
R-primer: 5'  GGG ACTAGT CGAAGGTGAACTATCCTCTTCATCG  3'
第二个引物设计
F-primer 5'  GGG GGTACC ATGGGGAGATTGAGATTAGCG  3‘(KpnI)
R-primer 5'  GGG ACTAGT CGAAGGTGAACTATCCTCTTCATC  3‘(Spel）
上面是同一个基因两种引物设计方案，为什么要选择第一个引物设计，第一个引物设计哪里好啊？求大神帮助。
2.
第一个引物设计
F-primer: 5'  GGG GGTACC ATGGTTGGAATGATTCGAGG  3'
R-primer: 5'  GGG ACTAGT GTCTGAATCTGAACTAGACTGATCCAC  3'
第二个引物设计
F-primer  5'GGG GGTACC ATGGTTGGAATGATTCGAGG  3'(KpnI)
R-primer 5' GGG ACTAGT  GTCTGAATCTGAACTAGACTGATCC  3‘(SpeI)
上面是同一个基因两种引物设计方案，为什么要选择第一个引物设计，第一个引物设计哪里好啊？求大神帮助。
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1楼 2019-03-06 11:33:35
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buchongyang

铜虫 (小有名气)
不知道，引物应该尽量长一点，避免特异性扩增，上下游的Tm，GC含量应该差不多。祝实验顺利

发自小木虫Android客户端
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2楼2019-03-06 14:46:29
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xiaoyuan612

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以把参考序列和引物序列都放到相关软件里面做个评分，估计是3’端有多个位置结合吧。
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3楼2019-03-07 15:43:50
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