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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酵母ROS
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dreamer梦

铁虫 (小有名气)

[求助] 酵母ROS

我最近在做酵母的，ROS用的是碧云天的试剂盒，DCFH-DA法，流式细胞仪测定，但是测定下来发现，每一组样品，包括阳性对照组的ROS含量都很低，感觉染料没有染上，操作步骤如下：
1.取样100微升，用PBS洗涤两次
2.加入1 mL提前稀释好的DCFH-DA（提前用PBS稀释，至浓度10 µmol/L），重悬，细胞浓度为1*106cfu/mL，（OD600约0.1~0.2之间）
3.37 ℃培养箱中培养25 min，每隔4 min，对细胞上下颠倒一次，使得染液与细胞充分接触
4.细胞被荧光染料充分标记后，离心，PBS洗1~2次，（将未进入细胞的荧光染料去除）收集沉淀，用PBS重悬，加入流式管中，等待检测
5.流式检测用FLI通道，488nm激发，发射波长525 nm，检测各样品荧光强度。
一直找不到合适的原因，请大神赐教，万分感谢！
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Better me, on the way
1楼 2019-03-04 09:28:28
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dreamer梦

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Sail352094 at 2019-03-04 16:15:38
你好，请问你用的峰图还是散点图？

峰图
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Better me, on the way
3楼2019-03-25 18:40:45
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Sail352094

新虫 (小有名气)
你好，请问你用的峰图还是散点图？

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2楼2019-03-04 16:15:38
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15222569263

新虫 (小有名气)
我也买了他家的试剂盒，不好用，检测不到，建议直接买DCFH DA粉末自己配制测

发自小木虫IOS客户端
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4楼2019-04-29 16:10:33
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迈马赫

新虫 (小有名气)
请问您做的结果怎么样？我也想学习一下

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5楼2019-06-29 21:50:43
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