| 查看: 606 | 回复: 0 | |||
[交流]
western-blot化学发光（ECL）的特异性差怎么办？
|
|
特异性差，出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面： 1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。 2. 一抗是多克隆抗体，或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体，或降低抗体浓度，缩短抗体孵育时间，优化一抗和二抗的使用浓度。 3. 洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量，延长洗膜时间，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20。 4. 目的蛋白在体内存在多种修饰形式，如乙酰化，甲基化，磷酸化，糖基化等。可查阅文献，用合适的方法去除蛋白的修饰，或选择合适的抗体。 5. 目的蛋白降解。重新准备蛋白样品，并加入足够的蛋白酶抑制剂。 6. 发光液质量问题，可选用发光清晰的ECL发光液，如Enlight。 |
回复此楼» 猜你喜欢
这年头没有找到涵评专家，还有中面上的可能吗
已经有9人回复
-
青C资助名额大幅增加！
已经有13人回复
-
风把牡丹吹跑了
已经有7人回复
-
教学课件你会给同学吗
已经有8人回复
-
26应届毕业生考博求助
已经有3人回复
-
重磅！青年科学基金项目（C类）资助增幅预计超过50%
已经有7人回复
-
求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法
已经有5人回复
-
本人最近太闲了，谁有问题可以提，每天会统一回复
已经有19人回复
-
申博自荐
已经有6人回复
-
材料类只有一篇综述能申博么
已经有4人回复