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heva

铁虫 (小有名气)

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[交流] 谁了解pCMV-luc?求助！！！

我不是学生物的，实验中想利用下这个东西，可是对它太不了解，在网上也没怎么搜到相关信息，希望生物知识渊博的朋友能帮帮我哦，能不能把它给俺介绍下？貌似是DNA，想知道它的碱基序列，长度，空间结构相关知识，先谢谢哈！

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1楼 2009-05-10 16:35:47

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lucky_xrg

金虫 (正式写手)

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heva(金币+2,VIP+0):谢谢支持！ 5-18 10:06

搜相关的文章看看
http://www.wjgnet.com/1009-3079/12/2045.asp

目的: 构建含荧光素酶(luciferase，luc)基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA，shRNA)表达质粒，并观察其在肝癌细胞Bel-7402中抑制外源荧光素酶的表达.

方法: 设计的两条反向重复的多聚核苷酸序列，退火形成双链DNA，再与双酶切后的载体PGE-1连接，构建pshRNA-luc重组质粒，与荧光素酶基因表达质粒pCMV-luc共转染肝癌细胞株BEL-7402，检测其对荧光素酶表达的影响.

结果: PCR和DNA序列分析证实了重组质粒构建成功. pshRNA-luc对共转染的pCMV-luc中的荧光素酶具有明显的抑制作用，抑制率可达86%(P <0.01).

结论: 构建的pshRNA-luc表达质粒能有效地抑制荧光素酶在肝癌细胞中的表达，为RNA干扰用于肿瘤的基因治疗打下基础.

http://epub.cnki.net/grid2008/de ... amp;dbname=CJFD2004

目的:探讨哺乳动物细胞能否修复DNA链间交联(imerstrand crosslink,ICL)。方法:构建带有丝裂霉素(mito mycin C,MMC)交联的质粒pCMV-Luc／ICL,将该交联质粒转染无修复酶缺陷和有修复酶缺陷的哺乳动物细胞系,观察细胞对 MMC链间交联的修复能力。结果

1)无酶缺陷的哺乳动物细胞对DNA的修复能力很强,即使缺乏同源序列,也能有效地去除DNA链间交联;(2)修复过程需要许多酶类参与,其中与核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)相关的酶类起着关键性作用,提示NER参与MMC链间交联的修复过程;(3)序列分析表明,非同源性重组修复为易错修复(error-prone re pair)。结论:哺乳动物细胞能有效地修复MMC诱导的DNA链间交联,核苷酸切除修复是重要的修复途径。