| 查看: 1036 | 回复: 1 | |||
[交流]
悬浮细胞的siRNA转染实验步骤 已有1人参与
|
|
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μl。 注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。 ⑵取1ul的Entranster-R4000，然后加入24ul无血清稀释液体，充分混匀，制成Entranster-R4000稀释液，终体积为25μl。室温静置5分钟。 ⑶将Entranster-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上）混合，室温静置15分钟。转染复合物制备完成。 ⑷将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基（可含10%血清和抗生素）的细胞上，前后移动培养皿，混合均匀。 注意：对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。 ⑸转染后6小时观察细胞状态，如状态良好可不必更换培养基，继续培养24-96小时得到结果。 注意：1.siRNA转染后，继续培养24-72小时在mRNA水平得到结果，继续培养24-96小时在蛋白水平得到结果。mRNA转染后，根据需要在24小时后得到结果。 2.在部分实验室，由于血清和培养条件等差异，转染后镜下培养基中可能出现少量黑点状沉淀，为转染试剂和血清中蛋白结合产物，不影响转染结果和细胞状态，可通过换液除去。 |
回复此楼» 猜你喜欢
296求调剂
已经有7人回复
-
302求调剂
已经有4人回复
-
086000生物与医药292求调剂
已经有5人回复
-
北科281学硕材料求调剂
已经有14人回复
-
材料与化工 322求调剂
已经有5人回复
-
333求调剂
已经有11人回复
-
材料专硕 335 分求调剂
已经有3人回复
-
07化学303求调剂
已经有3人回复
-
289求调剂
已经有11人回复
-
网络空间安全0839招调剂
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2019-10-23 10:53:12
20