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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

[交流] XhoI和BstXI的双酶切问题?

买的是Takara的内切酶。
两者buffer相同,但是前者酶切温度是37度,后者为45度;如何双切呢?是要分步切还是可以选择折中的温度同步切?
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赠人玫瑰,手有余香。
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

建议分布

哇,takara的内切酶,楼主好好摸一下酶切时间吧
2楼2009-05-09 13:52:15
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

时间?好像没什么的吧?
之前做过10ul体系的小切。先加低温条件的内切酶0.25ul,2h后再加高温条件的内切酶0.25ul,2h后发现可以切得很好。
但如果要大切的话,体系就会比较大,不能这么做。
赠人玫瑰,手有余香。
3楼2009-05-09 14:19:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

2h………………
我都是几分钟到1h搞定,因为takara的东西……
4楼2009-05-09 14:21:23
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

忘了说,我用的是NEB的~~~不用切2h那么久,切久了也没用
5楼2009-05-09 14:21:55
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-5-9 13:52:
建议分布

哇,takara的内切酶,楼主好好摸一下酶切时间吧

你是说切一个酶,回收后再切另一个么?
时间是什么意思啊?
赠人玫瑰,手有余香。
6楼2009-05-09 14:22:06
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

takara的酶活性很不好,假如载体没有切干净就去做连接转化,到时候空的几率很大
因为超螺旋质粒很快进入感受态

不需要回收,到时候提高温度加另外个酶即可
7楼2009-05-09 16:58:42
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