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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » XhoI和BstXI的双酶切问题？
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

[交流] XhoI和BstXI的双酶切问题？

买的是Takara的内切酶。
两者buffer相同，但是前者酶切温度是37度，后者为45度；如何双切呢？是要分步切还是可以选择折中的温度同步切？
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赠人玫瑰，手有余香。
1楼 2009-05-09 12:36:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
建议分布

哇，takara的内切酶，楼主好好摸一下酶切时间吧
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2楼2009-05-09 13:52:15
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)
时间？好像没什么的吧？
之前做过10ul体系的小切。先加低温条件的内切酶0.25ul，2h后再加高温条件的内切酶0.25ul，2h后发现可以切得很好。
但如果要大切的话，体系就会比较大，不能这么做。
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赠人玫瑰，手有余香。
3楼2009-05-09 14:19:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
2h………………
我都是几分钟到1h搞定，因为takara的东西……
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4楼2009-05-09 14:21:23
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
忘了说，我用的是NEB的~~~不用切2h那么久，切久了也没用
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5楼2009-05-09 14:21:55
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-5-9 13:52:
建议分布

哇，takara的内切酶，楼主好好摸一下酶切时间吧

你是说切一个酶，回收后再切另一个么？
时间是什么意思啊？
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赠人玫瑰，手有余香。
6楼2009-05-09 14:22:06
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
takara的酶活性很不好，假如载体没有切干净就去做连接转化，到时候空的几率很大
因为超螺旋质粒很快进入感受态

不需要回收，到时候提高温度加另外个酶即可
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7楼2009-05-09 16:58:42
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