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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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红花: 1
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虫号: 13010065
注册: 2018-11-29
专业: 实验动物学

[求助] COS－7细胞转染问题

转染实验前一天在24孔板里铺板COS-7细胞的时候，发现COS-7细胞聚集在底部的中间，请问这是怎么回事？当时把COS-7细胞加入孔里的时候分布还是均匀的，在贴壁的过程中就自己聚集到中间，由于中间细胞密度太大，很多COS-7细胞飘浮起来，不久就死亡了，进而导致转染效率就不好。我铺板的密度为40000/well，请问各位高手，我该怎么办？

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1楼2019-02-22 08:43:40

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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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帖子: 191
在线: 24.8小时
虫号: 13104654
注册: 2018-12-09
专业: 微生物遗传育种学

楼主，根据你叙述的我认为细胞死忙的很大原因是因为你细胞的铺板不均匀，铺板密度会直接影响到你转染试剂的使用量。听我师兄说实验室做转染也用24孔培养板，将siRNA 稀释液与RFect 稀释液混合，细胞的密度一般在40%左右（500ul）,楼主你的这个密度40000/well，我个人感觉密了点，我觉得楼主有必要摸索一下最佳铺板密度

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2楼2019-02-22 17:00:04

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