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电转染实验效率低的原因有哪些？
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电转染实验效率低，可能是以下几点原因： 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定期的细胞差，电转后，细胞膜的恢复能力强，而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA. 3. 质粒质量不佳 应选择纯度高的质粒，首先DNA／RNA应该超纯(A260／A280>1．8)，其次应不含内毒 素，同时质粒应溶于双蒸水而不是TE缓冲溶液。另外，DNA浓度不宜过高。 4. 电转染试剂不合适 电击会对细胞造成一定程度的伤害，在转染试剂的选择上要注意，应选择具有细胞膜修复成分的电转染试剂，如Entranster-E，可将电击对细胞的损伤降到最低。并且，Entranster-E可适用于lonza、Bio-rad、BTX等多种电转仪。 |
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