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神经细胞培养的经验之谈
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主要养海马神经元，四年来经验如下： 1.种植细胞以前确保无残留的多赖，可以用水洗1-2遍，我们为了确保效果，一般用抽滤泵，将多于的多赖吸干。 2.种植细胞1-2小时后，记得换液，仍然是换成Neurobasal+B27+双抗+Glumax，这样可以除去没有贴壁的碎片和胶质细胞，并且还可以将残留的胰酶也除去。很有必要。换液后细胞很干净并且胶质也比较少。 3.如果培养时，第三天换液时，发现胶质长到30%，那么一定要加Arac,我一般用的浓度是5UM。一旦胶质生长占优势，神经元的运命就很快结束了。 4.胎鼠的胎龄很重要，我感觉18.5天的海马最好，如果是17天的，神经元比较小，也比较脆弱，容易死亡，如果较大大于20天，胶质细胞就会比较多。皮层的话16-17天比较好。 5. 吹打成单细胞后，计数也很重要，密度对于神经元的生长是非常关键的，密度大，容易聚团，密度小了，神经元很难吸收到互相之间的营养，容易夭折，我一般用的密度是，每个35mm的培养皿种植30万个细胞。这个密度很合适。 6.培养过程中环境也很重要，一旦消化完后，吹打成单细胞，环境温度不能太低，太低了神经元就会缩小，所以一旦吹打完后，种植速度要快，并且开始时的培养液PH 值绝不能偏碱，偏碱对神经元的伤害也是比较大的。 7.多赖不能重复太多次数，我一般用两次就不用了，浓度为0.1mg/ml,永久了，细胞可能开始时没什么不好，但是过两天神经元就会有聚团的倾向。如果找不到其他的原因，我想也就是多赖分解掉了。 |
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2楼2009-05-07 15:33:59