| 查看: 1011 | 回复: 1 | |||
[交流]
细胞转染实验效率低的几个陷阱 已有1人参与
|
|
细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题，尤其是原代细胞转染，转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱，望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细胞污染 细胞污染也是造成细胞死亡，转染效率低下的一大原因。首先，转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。分享一个小秘诀：将提完质粒后或者提的最后一步，用75％乙醇沉淀，这样就除菌了。 3.质粒质量问题 转染用的质粒首先要保证数量，一般为2μg以上。质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质，也会影响转染效率。这个时候，就应该对质粒进行纯化和浓缩。 4.细胞状态不好 细胞状态不好，会导致转染效率低下。一般进行转染的细胞应该处于对数生长期。如果是贴壁细胞的话，贴壁率应该在70-80%；如果是悬浮细胞的话，应该是6×105个/孔（24孔板），一般是转染前一天换液，转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。 5.转染试剂问题 脂质体试剂毒性较大，易造成细胞死亡和转染效率底下。可选择非脂质体转染试剂，如Entranster试剂。 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
lukia» 猜你喜欢
282求调剂
已经有6人回复
-
271求调剂
已经有7人回复
-
【求调剂】293分环境工程求调剂材料/化工，服从调剂，抗压能力强！
已经有7人回复
-
085600材料与化工，一志愿广州985，求调剂
已经有6人回复
-
求材料调剂
已经有4人回复
-
复试调剂
已经有5人回复
-
085600，一志愿郑州大学，280分求调剂
已经有3人回复
-
085602 293分求调剂
已经有3人回复
-
A区一本交叉课题组，低分调剂，招收机械电子信息通信等交叉方向
已经有24人回复
-
材料调剂
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
lukia
金虫 (正式写手)
- 应助: 79 (初中生)
- 金币: 1470.9
- 散金: 270
- 红花: 14
- 帖子: 509
- 在线: 258.9小时
- 虫号: 2338780
- 注册: 2013-03-11
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
2楼2019-02-14 10:00:39
5