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质粒能表达MBP融合蛋白，不能表达目标蛋白，向大神求解！ 已有4人参与
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最近新构建了一个新的质粒，本人在这方面经验不足，插入序列就是网上搜到的wide type序列，没有做任何改变，是一个人源蛋白。原质粒是PET系列带MBP融合蛋白，在Rosetta大肠杆菌里表达，没有插入序列的空质粒能大量表达MBP，但是把序列插入在MBP后SDSPAGE上没有看到表达蛋白条带。请问： 1. 想过换宿主菌，但是既然同样的质粒在这里能表达MBP，不能表达MBP+新蛋白，是否不是宿主菌的原因？ 2. 试过20度，25度，OD = 0.7，0.8，0.9诱导，没有区别 3. 想尝试换培养基，目前我只知道LB和M9，除此以外大家还能告知一些其它可以尝试的培养基吗？ 4. 想过是否是因为我用的原基因序列，没有做密码子优化，网上可以做codon optimization，打算尝试一下，重新合成然后再插入这个质粒，大家觉得会有效果吗？P.S. rosetta本身就有表达稀有密码子的优势，所以我一开始没有在意这点，到现在也不知道到底是不是密码子没优化的原因。 5. 有人提议直接换质粒，我对不同质粒了解甚少，大家有什么推荐？ 读码框都确认过，测序也是对的，这些应该不是问题，当然老板也建议重新换家公司再测一次序列。 请有经验的大神赐教，感激不尽！ |
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