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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 跑电泳，样品先跑完，marker还未分开
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o螃蟹小姐

新虫 (著名写手)

[交流] 跑电泳，样品先跑完，marker还未分开

跑电泳时，我的样品已经跑到底，但是预染marker还没完全分开，这是什么原因，做wb经验少，还请各位帮帮忙，必有重谢。样品上样量20ul，蛋白浓度3ug/ml，marker按照说明书要求，上样量5ul，跑浓缩胶电压90，15%的分离胶，电压120，原本应该跑90分钟，因为样品跑得太快，60分钟就结束了实验。

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sakimia

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1楼 2019-01-29 11:12:59
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chaosyw

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能胶浓度对于marker而言太浓了，两者不匹配，推荐一篇wb操作方面的综述供参考吧：
https://www.labome.com/method/We ... s-and-Reagents.html
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3楼2019-01-30 08:19:42
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药大C斌

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by o螃蟹小姐 at 2019-01-31 09:23:02
这个marker以前用这个电压跑是没有问题的，有没有可能是胶的问题，胶是以前配的，在冰箱里放了三四天，会不会对这个有影响呀
...

以前用这个marker跑过这个浓度的胶吗？还有就是这个marker分子量适不适合15%的胶？我们跑15%的胶都是低电压慢慢跑的

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8楼2019-01-31 10:52:03
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普通回帖

高飞雄

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是胶不均匀，你重新配板胶试试

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2楼2019-01-29 11:18:09
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药大C斌

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
电压太高了，把电压降低，时间延长。最好低电压多跑一下

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4楼2019-01-30 15:22:28
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o螃蟹小姐

新虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 药大C斌 at 2019-01-30 15:22:28
电压太高了，把电压降低，时间延长。最好低电压多跑一下

这个marker以前用这个电压跑是没有问题的，有没有可能是胶的问题，胶是以前配的，在冰箱里放了三四天，会不会对这个有影响呀

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5楼2019-01-31 09:23:02
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o螃蟹小姐

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chaosyw at 2019-01-30 08:19:42
可能胶浓度对于marker而言太浓了，两者不匹配，推荐一篇wb操作方面的综述供参考吧：
https://www.labome.com/method/Western-Blot-Protocol-Troubleshootings-and-Survey-Results-on-Instruments-and-Reagents.html...

谢谢

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6楼2019-01-31 09:23:18
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o螃蟹小姐

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 高飞雄 at 2019-01-29 11:18:09
是不是胶不均匀，你重新配板胶试试

好的，谢谢，我先试试

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7楼2019-01-31 09:24:40
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药大C斌

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 药大C斌 at 2019-01-31 10:52:03
以前用这个marker跑过这个浓度的胶吗？还有就是这个marker分子量适不适合15%的胶？我们跑15%的胶都是低电压慢慢跑的
...

胶只要保持湿润，包起来，放在4°，3-4天没有影响的

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9楼2019-01-31 10:53:00
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o螃蟹小姐

新虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 药大C斌 at 2019-01-31 10:52:03
以前用这个marker跑过这个浓度的胶吗？还有就是这个marker分子量适不适合15%的胶？我们跑15%的胶都是低电压慢慢跑的
...

跑过，这是前期有人做摸的条件，我就直接用了，不知道为什么，我跑出来会是这个样子

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10楼2019-01-31 12:04:43
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