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灯火阑珊0818

新虫 (初入文坛)

[求助] 过表达载体测序 已有2人参与

构建过表达载体,pcDNA3.1(-)作为载体,过表片段长度是672bp,Amp作为抗生素,使用的感受态是DH5a,挑取单个菌落,37°C,220转摇菌12h,自己做了菌液PCR,可以跑出目的条带,但是有的有杂带有的没有杂带,总共选择七只送出去测序,但是最后反馈的结果都是样品浓度低,无信号,想知道是什么原因,或者可能是什么原因以进行排除,恳请各位指导
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好好吃饭,天天长肉
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包包大包子

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-13 20:35:33
那就是浓度低阿  回收的时候几管合并成一管,提高浓度

发自小木虫IOS客户端
2楼2019-01-28 12:01:51
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懦弱的青春

捐助贵宾 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-13 20:35:44
提的质粒自己有没有测个浓度啊?如果酶标仪测的浓度挺高,但测序测不出是否考虑假阳性?个人观点,以供参考。

发自小木虫Android客户端
3楼2019-01-28 14:03:07
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lizimu566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
灯火阑珊0818: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2019-01-29 15:48:07
提质粒酶切验证,之后在测序
4楼2019-01-29 09:11:32
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
灯火阑珊0818: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2019-01-29 15:48:13
即便是浓度低测序公司也有会有一些办法可以调整测序方案的,而且测序是通过pcr的办法,你样品浓度那得低到什么程度才不能测出来啊。所以我觉得不是这个问题,很可能是你提供的样品是污染的或者说就不是目的基因的序列,导致测序无信号的
5楼2019-01-29 11:18:30
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灯火阑珊0818

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by a13515517892 at 2019-01-29 11:18:30
即便是浓度低测序公司也有会有一些办法可以调整测序方案的,而且测序是通过pcr的办法,你样品浓度那得低到什么程度才不能测出来啊。所以我觉得不是这个问题,很可能是你提供的样品是污染的或者说就不是目的基因的序 ...

是的,假阳性
好好吃饭,天天长肉
6楼2019-01-29 15:46:45
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灯火阑珊0818

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lizimu566 at 2019-01-29 09:11:32
提质粒酶切验证,之后在测序

酶切完就没有条带了
好好吃饭,天天长肉
7楼2019-01-30 09:55:22
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lizimu566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 灯火阑珊0818 at 2019-01-30 09:55:22
酶切完就没有条带了...

那质粒构建有问题啊啊
8楼2019-01-30 10:36:10
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灯火阑珊0818

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lizimu566 at 2019-01-30 10:36:10
那质粒构建有问题啊啊...

重新涂板,挑菌,测序测出来啦,多谢
好好吃饭,天天长肉
9楼2019-02-01 10:44:20
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引用回帖:
9楼: Originally posted by 灯火阑珊0818 at 2019-02-01 10:44:20
重新涂板,挑菌,测序测出来啦,多谢...

恭喜
10楼2019-02-20 21:49:35
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